普魯士藍染色液的三種染色方法及注意事項
普魯士藍反應(Prussianblue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經過亞鐵化鉀和稀酸處理后可以產生藍色,常見于吞噬細胞或間質內,生成一種不溶解的藍色化合物即三 價鐵的亞鐵化物。普魯士藍染色液主要用于顯示細胞中鐵離子,常見于吞噬細胞內,可以很好地區分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩定性好、可以長期保存、不易產生沉淀、應用范圍廣, 可以進行復染。
普魯士藍細胞染色
自備材料:
1、固定液:10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等。
2、系列乙醇
普魯士藍三種染色種類及制備方法
染色種類 | 制備方法 |
石蠟切片染色 | 1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規脫水包埋。 |
冰凍切片染色 | 1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。 |
細胞染色 | 1、4%多聚甲醛固定10~20min。 |
普魯士藍染色注意事項:
1、切片脫蠟應盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時以蒸餾水為宜,因普通水內含鐵質。Perls stain 染色時,應根據樣本情況調整著色時間。
3、所有切片都應使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照,包含相當數量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。
4、冰凍切片和細胞染色,根據具體情況摸索實驗條件。
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