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普魯士藍染色液的三種染色方法及注意事項
發布時間:2020-07-22     作者:axc   分享到:

普魯士藍染色液的三種染色方法及注意事項

普魯士藍反應(Prussianblue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經過亞鐵化鉀和稀酸處理后可以產生藍色,常見于吞噬細胞或間質內,生成一種不溶解的藍色化合物即三 價鐵的亞鐵化物。普魯士藍染色液主要用于顯示細胞中鐵離子,常見于吞噬細胞內,可以很好地區分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩定性好、可以長期保存、不易產生沉淀、應用范圍廣, 可以進行復染。

普魯士藍染色液的三種染色方法及注意事項 

普魯士藍細胞染色

自備材料:

1、固定液:10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等。

2、系列乙醇

普魯士藍三種染色種類及制備方法

染色種類

制備方法

石蠟切片染色

1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規脫水包埋。
2、切片厚度4μm,常規脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項2),浸染15~30min。
5、蒸餾水充分沖洗2~5min。
6、入核固紅染色液,淡染細胞核5~10min。
7、自來水沖洗1~5s。
8、常規脫水透明,中性樹膠封固

冰凍切片染色

1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時間可以相應縮短。

細胞染色

1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時間可以相應縮短

普魯士藍染色注意事項:

1、切片脫蠟應盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。

2、整個操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時以蒸餾水為宜,因普通水內含鐵質。Perls stain 染色時,應根據樣本情況調整著色時間。

3、所有切片都應使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照,包含相當數量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)

4、冰凍切片和細胞染色,根據具體情況摸索實驗條件。

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