Cy5.5標記β2微球蛋白，Cy5.5-β2-microglobulin的合成及純化過程

β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）是一種輕鏈血漿蛋白，分子量約11.8 kDa，是內重要的免疫調節因子。Cy5.5標記β2-微球蛋白的合成及純化過程涉及高效偶聯、純化分離和質量檢測，確保獲得結構完整、功能活性的標記產物。

合成過程

原料準備：

高純度β2-MG蛋白溶解于緩沖液（如PBS，pH 8.0），保證蛋白穩定性。Cy5.5-NHS酯溶于無水DMSO中制備儲備液。

偶聯反應：

以適當摩爾比（如1:2至1:5，蛋白:染料）將Cy5.5-NHS酯緩慢滴加至β2-MG溶液中，反應在4℃至室溫下緩慢搖晃，時間約2–4小時。反應介質pH保持在8.0左右以確保氨基的活性。

反應機理：

Cy5.5-NHS酯與β2-MG的賴氨酸殘基ε-氨基發生親核取代，形成穩定酰胺鍵，實現熒光標記。該過程無需催化劑，條件溫和，有效避免蛋白變性。

反應終止：

加入甘氨酸等游離氨基物質封閉未反應的NHS酯，防止后續反應，穩定標記產物。

純化過程

透析或凝膠過濾：

采用透析（MWCO 3-10 kDa）或凝膠過濾柱（如Sephadex G-25）去除游離未反應染料和小分子雜質，獲得粗純品。

高效液相色譜（HPLC）純化：

進一步利用反相HPLC（RP-HPLC）純化，采用C18柱，梯度洗脫（乙腈-水，含微量TFA）分離標記蛋白與未標記蛋白及副產物。監測波長設為280 nm（蛋白）及675 nm（Cy5.5），確認純品峰。

純品收集及濃縮：

收集目標峰，冷凍干燥得到純度高、穩定的Cy5.5-β2-MG固體產物。

質量控制

質譜分析：確認標記分子量與理論值吻合，驗證偶聯成功。

UV-Vis和熒光光譜：檢測Cy5.5的吸收峰和熒光發射，評估染料活性和偶聯效率。

SDS-PAGE及免疫印跡：驗證蛋白完整性和標記情況。

產品名稱：Cy5.5標記β2微球蛋白，Cy5.5-β2-microglobulin

純度：95%+

性狀：固體或液體

儲藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

廠家：齊岳生物

關于我們

齊岳生物供應近紅外熒光花菁染料標記各種官能團的定制服務，如活性酯（NHS酯）、馬來酰亞胺（MAL）、疊氮（N?）、炔基（alkyne）等，便于與蛋白質、肽、多糖、抗體、寡核苷酸、納米顆粒等共價偶聯。可選擇多種功能團與目標分子進行精準結合，實現對蛋白質、多肽、抗體、核酸或納米材料的熒光修飾。此外，齊岳生物還提供定制染料標記服務，包括肽類、蛋白類、小分子、糖類等不同類型標的物，滿足用戶在科研、成像等多方面的個性化應用。

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