CY5.5-Streptavidin，CY5.5標(biāo)記鏈霉親和素的反應(yīng)條件

CY5.5-Streptavidin 是通過將近紅外熒光染料 CY5.5 共價標(biāo)記至鏈霉親和素（Streptavidin）分子上的復(fù)合物，常用于熒光免疫檢測、核酸雜交、蛋白質(zhì)印跡和體內(nèi)成像等生物實驗中。鏈霉親和素具有高度特異性地與生物素（Biotin）結(jié)合的能力，而CY5.5染料則提供了近紅外熒光信號，二者結(jié)合可實現(xiàn)目標(biāo)分子高靈敏度的可視化檢測。

CY5.5 通常以 NHS 酯的形式進行修飾。NHS酯活性高，能夠與蛋白質(zhì)中的伯胺基團（主要來源于賴氨酸殘基）在溫和條件下發(fā)生酰胺鍵連接，實現(xiàn)共價標(biāo)記。CY5.5-Streptavidin 的制備反應(yīng)條件如下：

緩沖體系選擇：反應(yīng)通常在碳酸氫鈉緩沖液（NaHCO?，pH 8.3–8.5）或磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.8–8.2）中進行。堿性環(huán)境有利于賴氨酸的伯胺基去質(zhì)子化，提高親核活性。避免使用含有伯胺類物質(zhì)（如Tris緩沖液），以免與NHS酯競爭反應(yīng)。

蛋白濃度：鏈霉親和素溶液濃度控制在1–5 mg/mL較為適宜。蛋白過稀不利于反應(yīng)效率，濃度過高則可能導(dǎo)致染料不均勻結(jié)合。

CY5.5-NHS 酯的準備：CY5.5-NHS酯需現(xiàn)用現(xiàn)配，通常溶于無水DMSO或DMF中，濃度約為1–10 mM。應(yīng)緩慢加入蛋白溶液中，避免局部濃度過高造成蛋白聚集或變性。

摩爾比例控制：染料與蛋白的摩爾比例常設(shè)定在3:1到10:1之間，具體比例需依據(jù)所需標(biāo)記程度與熒光強度調(diào)節(jié)。過度標(biāo)記可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象改變或功能喪失。

反應(yīng)溫度與時間：反應(yīng)在避光條件下，于室溫（20–25°C）下進行，持續(xù)30分鐘到2小時。避光操作防止CY5.5光降解，維持其熒光活性。

終止與純化：反應(yīng)結(jié)束后，通常加入甘氨酸或乙醇胺終止殘余NHS酯反應(yīng)。隨后使用凝膠過濾（如 Sephadex G-25）或超濾離心（10–30 kDa MWCO）去除游離染料與小分子雜質(zhì)。

質(zhì)量控制與表征：純化后使用紫外-可見分光光度計檢測吸收峰（CY5.5的λmax ~675 nm）以及蛋白吸收（280 nm），計算D/P比（Dye to Protein Ratio），并通過SDS-PAGE、電泳與質(zhì)譜分析確認蛋白完整性與標(biāo)記效率。

儲存條件：CY5.5-Streptavidin 可在4°C下短期保存，長期建議加入甘油（20%）或凍干后避光保存于–20°C以下。

綜上所述，CY5.5-Streptavidin 的標(biāo)記過程需嚴格控制反應(yīng)pH、溫度、時間和染料比例，以確保熒光強度與蛋白功能兼顧，是構(gòu)建多功能熒光生物探針的關(guān)鍵步驟之一。

產(chǎn)品名稱：CY5.5-Streptavidin，CY5.5標(biāo)記鏈霉親和素

純度：95%+

性狀：固體或液體

儲藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規(guī)格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

廠家：齊岳生物

關(guān)于我們

齊岳生物供應(yīng)近紅外熒光花菁染料標(biāo)記各種官能團的定制服務(wù)，如活性酯（NHS酯）、馬來酰亞胺（MAL）、疊氮（N?）、炔基（alkyne）等，便于與蛋白質(zhì)、肽、多糖、抗體、寡核苷酸、納米顆粒等共價偶聯(lián)。可選擇多種功能團與目標(biāo)分子進行精準結(jié)合，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)、多肽、抗體、核酸或納米材料的熒光修飾。此外，齊岳生物還提供定制染料標(biāo)記服務(wù)，包括肽類、蛋白類、小分子、糖類等不同類型標(biāo)的物，滿足用戶在科研、成像等多方面的個性化應(yīng)用。

推薦產(chǎn)品：

花菁染料CY3.5標(biāo)記馬來酰亞胺 CY3.5-MAL

花菁染料CY3.5標(biāo)記麥芽糖 Cy3.5-Maltose

花菁染料Cy3.5標(biāo)記木聚糖 Cy3.5-Xylan

花菁染料Cy3.5標(biāo)記木糖 Cy3.5-Xylose

僅供科研，不能用于人體實驗AXC.2025.06.23