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產(chǎn)品分類

熒光標(biāo)記

多孔納米

可用于各種羧基的親和配基(蛋白質(zhì)、多肽、糖)的氨基活化偶聯(lián)介質(zhì)(EAH-activated)

發(fā)布時(shí)間：2021-06-17 作者：AXC 分享到：

氨基活化偶聯(lián)介質(zhì)可用于各種含有羧基的親和配基（蛋白質(zhì)、多肽、糖等）的偶聯(lián)，。EAH-activated QZT4FF活化偶聯(lián)介質(zhì)以較高流速瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，經(jīng)過一系列的活化步驟，形成活化氨基，在溫和的條件下就可以偶聯(lián)各種帶羧基的配基。EAH-activated QZT4FF活化介質(zhì)具有使用方便、偶聯(lián)條件溫和、偶聯(lián)效率高和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)。

氨基活化介質(zhì)的理化性質(zhì)和產(chǎn)品特性如表1所示。

氨基活化偶聯(lián)介質(zhì)(EAH-activated)的應(yīng)用

EAH-activated活化偶聯(lián)介質(zhì)用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質(zhì)、多肽、糖等）的偶聯(lián)。具體的操作步驟如下（以4 ml活化膠偶聯(lián)BSA為例）：

（1）將約4 ml EAH活化膠水洗3-5次后抽干，再用pH 4.5的稀HCl溶液清洗2次，抽干后將4 ml EAH活化膠（約3.0 g）加入到10 ml的反應(yīng)器（磨口三角瓶或離心管）中，備用。

（2）準(zhǔn)確稱取40 mg BSA溶于4.0 ml稀HCl，pH 4.5溶液，溶解完全后加入84 mg EDC.HCl，溶解完全后測(cè)量其pH是否為4.5，否則需調(diào)到4.5，備用。

（3）將BSA溶液加入到活化膠中，反應(yīng)溫度恒定在4℃或25℃，搖床中振蕩混合（離心管水平放置），轉(zhuǎn)速120 rpm，反應(yīng)時(shí)間24 h（反應(yīng)前1小時(shí)pH有明顯的下降，可在15、30、45、60 min時(shí)測(cè)量pH并加入適量0.1M NaOH調(diào)pH至4.5）。

（4）反應(yīng)停止后，靜置，取上清離心（1000 g，5 min，室溫），收集上清液用于未偶聯(lián)BSA的濃度分析，計(jì)算偶聯(lián)的BSA的配基密度；將其余料液轉(zhuǎn)移到G3砂芯漏斗中用去離子水清洗、抽干。

（5）封閉未反應(yīng)的EAH：一般不需要封閉，如需封閉未反應(yīng)的氨基，可在偶聯(lián)反應(yīng)后（注意是在清洗前）直接往反應(yīng)物中加入4.2 ml 1 M 乙酸（醋酸），繼續(xù)反應(yīng)4 h。反應(yīng)停止后將料液轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干，用去離子水清洗。

（6）清洗

將制得的BSA瓊脂糖凝膠依次用5倍的去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 4.0）、去離子水、0.1M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液（pH 8.0）和去離子水充分洗滌（重復(fù)清洗3次），抽干，去除未反應(yīng)的配基。