Cyanine3-PEG-Protein A,CY3-聚乙二醇-蛋白A的反應(yīng)條件
Cyanine3-PEG-Protein A是將熒光染料Cyanine3標(biāo)記的聚乙二醇(PEG)鏈通過(guò)共價(jià)方式連接于蛋白A分子上的復(fù)合材料。其合成涉及多步反應(yīng),關(guān)鍵在于選擇適宜的反應(yīng)條件以保證蛋白A的功能性及染料的熒光活性。
首先,PEG鏈通常經(jīng)過(guò)活化處理,常用的活性基團(tuán)包括N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS酯)或馬來(lái)酰亞胺(Mal),以實(shí)現(xiàn)與蛋白A上游離胺基或巰基的共價(jià)結(jié)合。活化PEG應(yīng)在低溫(4℃)和干燥環(huán)境下保存,防止水解失活。
蛋白A的溶液準(zhǔn)備通常采用緩沖體系,如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS),pH控制在7.2至7.5之間,以維持蛋白的穩(wěn)定構(gòu)象和活性。反應(yīng)體系需保持適度鹽濃度,避免蛋白質(zhì)變性或非特異性聚集。
偶聯(lián)反應(yīng)一般在室溫或低溫條件下進(jìn)行,反應(yīng)時(shí)間控制在數(shù)小時(shí)范圍,避免過(guò)度反應(yīng)導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷。緩沖液中可適當(dāng)添加保護(hù)劑如甘油或低濃度鹽以穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)。
熒光染料CY3的引入多通過(guò)先將其與PEG連接形成活性中間體,再與蛋白A反應(yīng)完成。此分步法有助于控制標(biāo)記比例和避免染料直接作用于蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)。
反應(yīng)結(jié)束后,通過(guò)透析、凝膠過(guò)濾或離心過(guò)濾器進(jìn)行純化,去除游離染料及未結(jié)合PEG。純化產(chǎn)品的活性和熒光性質(zhì)通過(guò)紫外-可見(jiàn)光譜、熒光光譜以及蛋白活性測(cè)定方法進(jìn)行驗(yàn)證。
整體反應(yīng)條件強(qiáng)調(diào)溫和性和可控性,避免蛋白質(zhì)的變性和染料的光漂白,同時(shí)確保高效偶聯(lián)和產(chǎn)品均一性。這些條件為Cyanine3-PEG-Protein A的成功制備和后續(xù)生物學(xué)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
產(chǎn)品名稱:Cyanine3-PEG-Protein A
純度:95%+
性狀:固體或液體
儲(chǔ)藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
廠家:齊岳生物
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