產(chǎn)品名稱：FITC-NHS，異硫氰酸酯熒光素-活性酯的優(yōu)勢與局限性

一、注意事項

1. 避光操作

FITC-NHS對光敏感，所有步驟需在暗處或黃光下進(jìn)行，防止熒光淬滅。

2. pH控制

反應(yīng)緩沖液pH應(yīng)保持在7.2-7.5（PBS）或8.5-9.0（CBS），避免酸性條件導(dǎo)致NHS酯水解或堿性條件導(dǎo)致蛋白變性。

3. 標(biāo)記度控制

過度標(biāo)記可能掩蓋目標(biāo)分子的活性位點（如抗體抗原結(jié)合位點），需通過預(yù)實驗優(yōu)化FITC-NHS與目標(biāo)分子的摩爾比（通常標(biāo)記度為1-5 FITC/分子）。

4. 純度驗證

通過HPLC或SDS-PAGE確認(rèn)標(biāo)記產(chǎn)物純度，避免未反應(yīng)FITC-NHS干擾實驗（FITC-NHS在280 nm無吸收，可通過A???/A???比值評估純度，優(yōu)質(zhì)產(chǎn)物比值>0.5）。

5. 儲存條件

FITC-NHS需分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融（每次凍融可能導(dǎo)致活性損失10%-20%）；標(biāo)記產(chǎn)物需分裝后-80℃保存，避免熒光淬滅。

二、優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢

高特異性：NHS酯與氨基反應(yīng)具有高度選擇性，減少非特異性結(jié)合。

強(qiáng)熒光信號：FITC量子產(chǎn)率高（約0.9），適合低豐度靶分子檢測。

操作簡便：反應(yīng)條件溫和（4℃，pH 7.4），無需復(fù)雜設(shè)備。

局限性

光淬滅：FITC熒光易受光照影響，需嚴(yán)格控制實驗光照條件。

pH敏感性：NHS酯在pH>8.5時易水解，需優(yōu)化緩沖液pH。

標(biāo)記度限制：過度標(biāo)記可能影響目標(biāo)分子活性，需平衡熒光強(qiáng)度與功能保留。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實驗！wyh

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