產(chǎn)品名稱：FITC-Transferrin，異硫氰酸酯熒光素-轉(zhuǎn)鐵蛋白的合成方法與優(yōu)化

合成方法與優(yōu)化

1. 反應體系設(shè)計

溶劑選擇：

常用磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）或碳酸鹽緩沖液（pH 9.0），后者可提高氨基的親核性，促進反應效率。

摩爾比控制：

FITC與Tf的摩爾比通常為10:1至20:1，以確保充分標記同時避免過度修飾導致蛋白活性喪失。

反應條件：

溫度：4°C（低溫減少蛋白降解）或室溫（25°C，加速反應）。

時間：1-2小時（需通過時間梯度實驗優(yōu)化）。

避光：FITC對光敏感，反應需在暗處進行。

2. 具體操作步驟

Tf預處理：

將Tf溶解于緩沖液（如PBS，pH 7.4），濃度調(diào)整至1-5 mg/mL。

通過超濾或透析去除可能存在的雜質(zhì)（如二價離子）。

FITC溶解：

將FITC溶解于無水DMSO（終濃度≈10 mg/mL），避免水解。

偶聯(lián)反應：

在攪拌下緩慢滴加FITC溶液至Tf溶液中（摩爾比FITC:Tf=15:1）。

4°C避光反應2小時，或室溫反應1小時。

純化分離：

凝膠過濾層析：

使用Sephadex G-25或PD-10脫鹽柱，以PBS為洗脫液，分離FITC-Tf與未反應的FITC。

超濾離心：

通過10 kDa截留分子量的超濾管（如Amicon Ultra-15），離心濃縮并更換緩沖液。

表征驗證：

熒光光譜：

測定激發(fā)/發(fā)射波長是否與FITC一致（λ_ex=495 nm, λ_em=520 nm）。

SDS-PAGE：

通過凝膠電泳分析蛋白純度及標記后分子量變化（FITC-Tf應比未標記Tf略大）。

BCA蛋白定量：

測定FITC-Tf濃度，結(jié)合熒光強度計算標記效率（FITC分子數(shù)/Tf分子）。

受體結(jié)合實驗：

通過流式細胞術(shù)或ELISA驗證FITC-Tf與TfR的結(jié)合能力（需與未標記Tf對比）。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實驗！wyh

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