產(chǎn)品名稱：Biotin-cRGD，生物素-環(huán)肽的合成方法

合成方法

（1）固相合成法（SPPS）

步驟1：合成cRGD多肽

樹脂選擇：

Rink Amide樹脂：生成C端酰胺（c(RGDfK)-NH?）。

Wang樹脂：生成C端羧酸（c(RGDfK)-COOH）。

氨基酸偶聯(lián)：

依次偶聯(lián)Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH等。

環(huán)化：在賴氨酸側(cè)鏈氨基與天冬氨酸羧基之間形成內(nèi)酰胺鍵（使用HATU/DIPEA活化）。

切割樹脂：

TFA/TIS/H2O（95:2.5:2.5）切割，得到c(RGDfK)-NH?或c(RGDfK)-COOH。

步驟2：生物素修飾

方法1：直接修飾cRGD的氨基

生物素羧酸（Biotin-COOH）與c(RGDfK)-NH?通過EDC/NHS活化反應(yīng)：

溶解Biotin-COOH（1 eq）和EDC（1.5 eq）在DMF中，室溫攪拌30分鐘。

加入NHS（1.5 eq），繼續(xù)反應(yīng)30分鐘。

加入c(RGDfK)-NH?（1 eq），pH 7.5-8.0，室溫反應(yīng)過夜。

HPLC純化，得到Biotin-c(RGDfK)。

方法2：通過連接臂修飾

先合成Biotin-PEG?-NHS（商業(yè)可購），再與c(RGDfK)-NH?反應(yīng)：

溶解Biotin-PEG?-NHS（1 eq）和c(RGDfK)-NH?（1.2 eq）在PBS（pH 7.4）中。

室溫反應(yīng)2小時，HPLC純化。

（2）液相合成法

適用于小規(guī)模合成或復(fù)雜修飾：

預(yù)先合成生物素-PEG?-COOH，再通過EDC/NHS與c(RGDfK)-NH?偶聯(lián)。

優(yōu)勢：可精確控制反應(yīng)條件（如pH、溫度），減少副產(chǎn)物。

（3）純化與表征

純化：

反相HPLC（C18柱）：分離未反應(yīng)的生物素或cRGD。

分子篩層析（如Sephadex G-15）：去除小分子雜質(zhì)。

表征：

質(zhì)譜（MS）：確認(rèn)分子量（如Biotin-c(RGDfK)的理論分子量≈1200 Da）。

HPLC保留時間：與未修飾cRGD對比，驗證純度（>95%）。

生物素活性檢測：通過ELISA或熒光極化實驗驗證與鏈霉親和素的結(jié)合能力。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實驗！wyh

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