CY3-siNC,CY3標記非編碼小干擾RNA的制備方法
Cy3-siNC是一種非編碼(Negative Control,負對照)小干擾RNA,其序列不靶向任何已知基因,且帶有熒光染料Cy3,用作RNA干擾實驗中的對照組,確保實驗結果的特異性和準確性。
制備方法詳述:
非編碼序列設計
設計不與任何細胞內mRNA匹配的隨機序列,保證不影響任何基因表達。序列長度通常為19-21核苷酸,結構穩定。
合成與純化
利用固相化學合成方法合成siRNA雙鏈,合成流程包括核苷酸逐步加成、脫保護及切割。
純化步驟采用高效液相色譜(HPLC)或凝膠電泳去除雜質,保證產品純度。
Cy3標記修飾
在合成時,5’端或3’端引入帶有氨基修飾的核苷酸,為Cy3-NHS酯的標記反應提供位點。
Cy3-NHS酯在適宜緩沖條件(pH 8.0-8.5)下與氨基發生酰胺鍵形成,標記反應一般進行1-3小時,避光以防熒光淬滅。
雙鏈退火
標記單鏈siRNA與對應互補鏈按1:1比例混合,緩慢退火形成穩定雙鏈結構,模擬siRNA活性形式。
純化與鑒定
反應完成后通過透析、凝膠過濾或HPLC純化,去除未反應的Cy3和游離單鏈。
采用紫外-可見光譜、熒光光譜和質譜確認標記的成功與分子完整性。
儲存條件
純化后產品凍干或儲存在-20℃避光環境,確保標記熒光穩定和分子活性。
質量控制
進行功能驗證,確保siNC不干擾靶基因表達,熒光強度適合檢測。
產品名稱:CY3-siNC
純度:95%+
性狀:固體或液體
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
廠家:齊岳生物
關于我們
齊岳生物供應近紅外熒光花菁染料標記各種官能團的定制服務,如活性酯(NHS酯)、馬來酰亞胺(MAL)、疊氮(N?)、炔基(alkyne)等,便于與蛋白質、肽、多糖、抗體、寡核苷酸、納米顆粒等共價偶聯。可選擇多種功能團與目標分子進行精準結合,實現對蛋白質、多肽、抗體、核酸或納米材料的熒光修飾。此外,齊岳生物還提供定制染料標記服務,包括肽類、蛋白類、小分子、糖類等不同類型標的物,滿足用戶在科研、成像等多方面的個性化應用。
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僅供科研,不能用于人體實驗AXC.2025.06.23