產品名稱:Dextran-CY5,葡聚糖-花菁素CY5的合成與純化
合成與純化
合成步驟
葡聚糖修飾(以氨基化為例):
還原胺化:將葡聚糖與乙二胺在酸性條件(如乙酸)下反應,羥基與乙二胺的氨基發生還原胺化,生成氨基化葡聚糖(Dextran-NH?)。
純化:通過旋轉蒸發去除未反應的乙二胺,再用透析(截留分子量1,000 Da)去除小分子副產物。
CY5偶聯:
活化CY5:CY5粉末溶解于無水DMSO或DMF中,配制成高濃度儲備液(10-20 mg/mL)。
偶聯反應:氨基化葡聚糖溶解于碳酸鹽緩沖液(pH 9.5),加入CY5溶液,室溫避光反應2-4小時,確保氨基與NHS酯充分反應。
反應終止:加入甘氨酸(Glycine)淬滅未反應的CY5,避免過度標記。
純化方法
透析:使用截留分子量10,000-30,000 Da的透析袋,去除未反應的CY5、甘氨酸及小分子副產物,更換緩沖液(如PBS)3-5次。
凝膠過濾層析:通過Sephadex G-50或G-75柱進一步純化,分離Dextran-CY5與未偶聯的葡聚糖或CY5。
表征:通過熒光光譜(驗證CY5特征發射峰670 nm)、凝膠滲透色譜(GPC,檢測分子量分布)及紫外-可見光譜(葡聚糖特征吸收峰280 nm)確認標記效率及產物純度。
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