英文名稱:Ac-YVAD-AMC
中文名稱:乙酰-酪氨酸-纈氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素
Ac-YVAD-AMC是一種熒光標(biāo)記的四肽底物,專用于檢測(cè)半胱天冬酶-1(Caspase-1)的酶活性。其結(jié)構(gòu)中,N端乙?;ˋc)保護(hù)肽鏈免受降解;酪氨酸-纈氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(YVAD)序列為Caspase-1的特異性切割位點(diǎn);C端7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)作為熒光基團(tuán),在未被切割時(shí)因共軛結(jié)構(gòu)熒光較弱,酶切后釋放游離AMC,其熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)380 nm,發(fā)射波長(zhǎng)460 nm)顯著增強(qiáng),可通過(guò)熒光分光光度計(jì)或微孔板閱讀器定量檢測(cè)。
Caspase-1在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮核心作用,其活性變化與多種炎癥性疾病(如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸?。┟芮邢嚓P(guān)。Ac-YVAD-AMC通過(guò)提供高靈敏度的熒光檢測(cè)手段,成為研究Caspase-1功能的重要工具。例如,在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)中,可通過(guò)測(cè)量細(xì)胞裂解液中Caspase-1對(duì)Ac-YVAD-AMC的切割活性,評(píng)估炎癥小體(如NLRP3)的激活狀態(tài);在藥物篩選中,該底物可用于檢測(cè)化合物是否通過(guò)抑制Caspase-1活性降低炎癥因子(如IL-1β)的釋放。
使用Ac-YVAD-AMC時(shí)需優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件以提高準(zhǔn)確性。反應(yīng)緩沖液需包含適當(dāng)濃度的DTT以維持酶活性,同時(shí)避免過(guò)高濃度干擾熒光檢測(cè);反應(yīng)溫度(通常37℃)及時(shí)間需根據(jù)樣本類型調(diào)整,以確保熒光信號(hào)與酶活性呈線性關(guān)系。此外,需通過(guò)添加特異性抑制劑(如Ac-YVAD-CHO)驗(yàn)證信號(hào)特異性,排除其他蛋白酶(如Caspase-4/5)的干擾。目前,Ac-YVAD-AMC已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)及藥理學(xué)研究,為理解炎癥相關(guān)疾病的分子機(jī)制提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐。
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