英文名稱：Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AFC
中文名稱：乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-纈氨酸-天冬氨酸-7-氨基-4-三氟甲基香豆素

乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-纈氨酸-天冬氨酸-7-氨基-4-三氟甲基香豆素（Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AFC，簡稱Ac-DEVD-AFC）是一種熒光標記的四肽底物，專用于檢測半胱天冬酶-3（Caspase-3）及Caspase-7的酶活性。其結(jié)構(gòu)中，N端乙酰基（Ac）防止肽鏈降解，天冬氨酸-谷氨酸-纈氨酸-天冬氨酸（DEVD）序列為Caspase-3/7的特異性切割位點，C端7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）作為熒光基團，在未被切割時因共軛結(jié)構(gòu)熒光較弱，酶切后釋放游離AFC，其熒光強度（激發(fā)波長400 nm，發(fā)射波長505 nm）顯著增強，可通過熒光分光光度計或微孔板閱讀器定量檢測。

Caspase-3/7是細胞凋亡執(zhí)行階段的核心蛋白酶，其活性變化可反映凋亡信號通路的激活狀態(tài)。Ac-DEVD-AFC通過提供高靈敏度的熒光檢測手段，成為研究細胞凋亡機制的重要工具。例如，在神經(jīng)退行性疾病模型中，可通過測量腦組織勻漿中Caspase-3/7對Ac-DEVD-AFC的切割活性，評估神經(jīng)元凋亡程度；在藥物毒性評價中，該底物可用于檢測化合物是否通過誘導凋亡導致細胞死亡。

Ac-DEVD-AFC的使用需優(yōu)化實驗條件以提高準確性。例如，反應(yīng)緩沖液需包含適當濃度的DTT以維持酶活性，同時避免過高濃度干擾熒光檢測；反應(yīng)溫度（通常37℃）及時間需根據(jù)樣本類型調(diào)整，以確保熒光信號與酶活性呈線性關(guān)系。此外，需通過添加特異性抑制劑（如Ac-DEVD-CHO）驗證信號特異性，排除其他蛋白酶的干擾。目前，Ac-DEVD-AFC已廣泛應(yīng)用于細胞生物學、藥理學及病理學研究，為理解凋亡相關(guān)疾病的分子機制提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐。

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