文獻：脂質膜上的微粒組裝途徑

鏈接：https://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5

作者：卡斯珀·范德韋爾1 ? 多麗絲·海因里希1,2 ? 丹妮拉·J·克拉夫特1 

節選：

膜制備

采用標準電膨脹技術（14）制備了直徑在5至20微米之間的巨型單層囊泡（GUVs）。在氯仿中配制了2克/升的脂質混合物，其中包含97.5重量%的二油酰磷脂酰膽堿（DOPC）、2.0重量%的聚乙二醇-聚氧乙烯醚-生物素（DOPE-PEG-biotin）和0.5重量%的聚乙二醇-羅丹明（DOPE-rhodamine）。接下來，在兩個6平方厘米的氧化銦錫涂層載玻片（15–25 μm，Sigma-Aldrich）上各干燥10微升該溶液，隨后浸入含有100毫摩爾葡萄糖和0.3毫摩爾疊氮化鈉的49:51重水:水溶液中。為誘導囊泡形成，電*在10赫茲下施加1.1伏（均方根值）電壓2小時。由此獲得的囊泡在室溫下儲存在牛血清白蛋白包被的小瓶中。為減少較小囊泡的數量，我們在使用前直接用Whatmann 5.0微米孔徑的硝酸纖維素濾膜過濾GUV溶液（15）。對于膜管化實驗，使用神經節苷脂GM1和染料霍亂毒素488對外部膜葉進行染色，具體步驟如下：將上述氯仿中的脂質混合物轉移到甲醇中，加入0.2重量%的GM1。然后按上述方法進行電膨脹。在樣品制備前，向磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中加入50毫克/升的霍亂毒素488，僅對囊泡的外部葉進行染色。

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