產(chǎn)品名稱：FITC-HA-Biotin，熒光素-透明質(zhì)酸-生物素的制備方法

制備方法

方法1：分步合成法

HA的活化

將HA（分子量10-100 kDa）溶解于MES緩沖液（pH 6.0），加入EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺）和NHS（N-羥基琥珀酰亞胺），活化HA的羧基（-COOH），生成NHS酯中間體。

FITC標(biāo)記

將FITC溶解于DMSO，緩慢滴加至活化后的HA溶液中，室溫避光反應(yīng)4小時(shí)，通過透析（MWCO 3.5 kDa）去除未反應(yīng)的FITC，得到FITC-HA。

生物素修飾

將FITC-HA溶解于PBS（pH 7.4），加入生物素-NHS酯（或生物素-PEG-NHS），反應(yīng)2小時(shí)，通過透析或凝膠過濾純化，最終產(chǎn)物為FITC-HA-Biotin。

方法2：點(diǎn)擊化學(xué)法（更高效）

炔烴修飾HA

將HA與炔丙基胺反應(yīng)，引入炔烴基團(tuán)（通過酰胺鍵連接）。

疊氮化FITC和生物素

合成疊氮基-FITC（如FITC-PEG-N?）和疊氮基-生物素（如Biotin-PEG-N?）。

點(diǎn)擊偶聯(lián)

在CuSO?/抗壞血酸鈉催化下，將炔烴-HA與疊氮基-FITC和疊氮基-生物素反應(yīng)，生成FITC-HA-Biotin，通過HPLC純化，收率＞85%。

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