FITC-NHS

熒光素NHS酯（FITC-NHS）用于蛋白質(zhì)、體共價(jià)標(biāo)記

一、基本信息概覽

項(xiàng)目 內(nèi)容

中文名稱 熒光素NHS酯，F(xiàn)ITC-NHS

英文名稱 NHS-Fluorescein 或 Fluorescein-NHS Ester

別名 熒光素-N-羥基琥珀酰亞胺酯、NHS-Fluorescein Ester

分子式 C23H15NO9

分子量 449.37 g/mol

CAS號(hào) 105022-66-6（或常見商品混合物）

激發(fā)波長（Ex） 494–495 nm

發(fā)射波長（Em） 517–520 nm

純度 ≥95%（HPLC）

形式 橙黃色或淡黃色粉末

溶解性 易溶于DMSO、DMF、無水乙醇、無水DMSO

儲(chǔ)存條件 -20°C，避光、干燥、密封保存

包裝規(guī)格 常見1 mg、5 mg、10 mg、25 mg 或按需定制

二、產(chǎn)品結(jié)構(gòu)與反應(yīng)原理

1. FITC-NHS結(jié)構(gòu)說明

FITC-NHS是通過在熒光素結(jié)構(gòu)上引入 N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS酯） 基團(tuán)而制成的活性熒光染料。該基團(tuán)對(duì)伯胺具有高親和性，使其成為蛋白質(zhì)、肽類、小分子等胺基標(biāo)記的首選熒光試劑。

2. 反應(yīng)原理

FITC-NHS 主要通過 NHS酯與伯胺基（–NH?） 的親核反應(yīng)，在溫和條件下形成穩(wěn)定的 酰胺鍵（–CONH–）。反應(yīng)條件通常為：

pH 7.2–8.5 的緩沖液（如PBS、碳酸鹽緩沖液）；

反應(yīng)溫度：室溫或4°C；

反應(yīng)時(shí)間：15分鐘–2小時(shí)不等；

避光操作。

三、優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)

? 高活性：NHS酯反應(yīng)效率高，快速與伯胺反應(yīng)；

? 熒光穩(wěn)定：FITC熒光強(qiáng)、在生物樣品中易檢測；

? 通用性廣：可標(biāo)記蛋白、體、多肽、納米材料等；

? 可調(diào)節(jié)性：通過控制摩爾比調(diào)節(jié)標(biāo)記密度；

? 生物兼容：適合細(xì)胞標(biāo)記、分子成像、免疫實(shí)驗(yàn)等；

? 儲(chǔ)存方便：凍干粉末穩(wěn)定性好，保存周期長。

四、技術(shù)指標(biāo)與質(zhì)控信息

項(xiàng)目 指標(biāo)

純度（HPLC） ≥95%

水分含量 <1.5%（卡爾費(fèi)休法）

熒光強(qiáng)度 Ex 495 nm / Em 520 nm，高亮綠色

活性保留率 ≥90%（6個(gè)月內(nèi)）

反應(yīng)選擇性 專一性強(qiáng)，僅標(biāo)記伯胺基團(tuán)

背景熒光 低

溶解性 DMSO、DMF中優(yōu)溶，不溶于水

穩(wěn)定性 避光冷藏穩(wěn)定12個(gè)月以上

不含緩沖鹽或雜質(zhì) 高純度制劑

五、典型應(yīng)用方向

1. 蛋白質(zhì)與體標(biāo)記

FITC-NHS 是標(biāo)記體、酶、血清白蛋白（如FITC-BSA、FITC-IgG）等蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)試劑。其標(biāo)記流程包括：

調(diào)整蛋白至pH 8.3緩沖體系；

加入FITC-NHS（溶于DMSO）；

溫和反應(yīng)30–60分鐘；

通過透析、凝膠過濾（如Sephadex G-25）去除游離染料；

儲(chǔ)存于PBS中，4°C避光保存。

2. 小分子和藥物標(biāo)記

用于標(biāo)記含有伯胺基的小分子，例如：

藥物化合物；

多肽鏈（如GRGDY-NH?）；

藥物靶向探針；

細(xì)胞滲透肽（如TAT、Penetratin）；

便于后續(xù)細(xì)胞攝取、定位、熒光定量等研究。

3. 納米材料功能化

FITC-NHS 可用于：

納米粒（如SiO?、PLGA、AuNPs）的表面標(biāo)記；

與聚乙烯亞胺（PEI）、殼聚糖、BSA等表面胺基偶聯(lián)；

構(gòu)建熒光追蹤型藥物遞送系統(tǒng)；

熒光檢測、細(xì)胞靶向及體內(nèi)分布可視化。

4. 細(xì)胞標(biāo)記與成像

FITC-NHS 通過與細(xì)胞膜或胞內(nèi)蛋白反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞或固定細(xì)胞的標(biāo)記；

可用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀分析；

特別適用于非透膜染料標(biāo)簽的構(gòu)建（如胺標(biāo)記脂質(zhì)體）；

某些實(shí)驗(yàn)中可用于單細(xì)胞標(biāo)記或熒光識(shí)別。

5. 免疫分析與生物芯片

在ELISA、Western blot、蛋白質(zhì)芯片中，F(xiàn)ITC-NHS標(biāo)記后的體或原可用于：

熒光檢測系統(tǒng)（替代HRP）；

多重標(biāo)記、通道分辨；

熒光信號(hào)增強(qiáng)或熒光共聚焦檢測。

六、使用說明與實(shí)驗(yàn)建議

1. 溶解建議

推薦使用無水DMSO或DMF溶解；

常規(guī)濃度：1–10 mg/mL；

一次性使用量根據(jù)目標(biāo)物分子量及摩爾比計(jì)算；

溶液可臨時(shí)使用，避免長時(shí)間存放（活性易水解）；

建議現(xiàn)配現(xiàn)用，避免暴露在潮濕空氣中。

2. 標(biāo)記流程（以蛋白質(zhì)為例）

示例操作：

取蛋白質(zhì)（如IgG）溶于0.1 M NaHCO?（pH 8.3）緩沖液；

加入FITC-NHS（以1:5～1:20的摩爾比）；

室溫避光反應(yīng)30–60分鐘；

通過透析或凝膠柱去除未反應(yīng)的FITC；

用PBS重溶，測定A495與A280判斷標(biāo)記度。

標(biāo)記度計(jì)算公式：

標(biāo)記度（FITC/BSA） = (A495 × 3.1) / (A280 - (0.31 × A495))

3. 注意事項(xiàng)

? 避光操作：FITC易光降解，操作過程中盡量避光；

? pH控制：過酸或過堿會(huì)影響NHS酯反應(yīng)效率與染料穩(wěn)定性；

? 水敏感性：FITC-NHS與水反應(yīng)迅速，應(yīng)避免與水直接接觸；

? 反應(yīng)時(shí)間控制：反應(yīng)過久可能導(dǎo)致非特異性標(biāo)記或蛋白失活；

? 除雜工藝：必須徹底去除游離FITC，避免背景熒光干擾。

七、包裝與訂購信息

規(guī)格 包裝形式 用途建議

1 mg 小瓶凍干粉末 實(shí)驗(yàn)起步、方法優(yōu)化

5 mg 凍干粉末 多次蛋白標(biāo)記

10 mg 凍干粉末 納米粒或多批次實(shí)驗(yàn)

25 mg+ 定制規(guī)格 藥物開發(fā)、項(xiàng)目需求

可根據(jù)需求提供 高純度版、低水分版、低內(nèi)毒素版，并支持定制凍干溶液形式。

八、相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品名稱 應(yīng)用

BSA-FITC 熒光蛋白對(duì)照、細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)

FITC-Dextran 滲透性實(shí)驗(yàn)、微血管成像

FITC-PEG-NHS 修飾PEG，連接蛋白/體

FITC-小分子探針 靶點(diǎn)示蹤、功能驗(yàn)證

Cy3/Cy5-NHS 紅色/遠(yuǎn)紅色熒光標(biāo)記替代

ROX/TRITC-NHS 多色染料擴(kuò)展選擇

九、總結(jié)

FITC-NHS 是一種活性高的熒光標(biāo)記試劑，因其反應(yīng)條件溫和、專一性強(qiáng)、信號(hào)明亮且易于追蹤，被廣泛應(yīng)用于蛋白標(biāo)記、細(xì)胞成像、納米藥物開發(fā)、生物芯片和免疫檢測等多個(gè)領(lǐng)域。通過規(guī)范的操作與優(yōu)化的標(biāo)記參數(shù)，能夠高效、穩(wěn)定地將熒光基團(tuán)引入目標(biāo)分子，為生物分析與可視化提供強(qiáng)有力工具。

西安齊岳生物專業(yè)提供各類熒光標(biāo)記產(chǎn)品及定制服務(wù)，覆蓋小分子藥物、蛋白質(zhì)、多肽、核酸等多種生物分子。我們采用FITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor等多種主流熒光染料，滿足科研和產(chǎn)業(yè)在分子成像、藥物追蹤、機(jī)制研究等領(lǐng)域的需求。

西安齊岳生物確保標(biāo)記分子高效、穩(wěn)定且保留生物活性。我們支持個(gè)性化定制，靈活設(shè)計(jì)標(biāo)記方案，快速響應(yīng)客戶需求。

廠家:西安齊岳生物科技有限公司

用途:科研

狀態(tài)：固體/粉末/溶液

產(chǎn)地:西安

溫馨提醒:僅供科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)!

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