文獻：使用分子定義的成像劑對*性*PD-L1*體定位進行多尺度成像

鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5

作者：艾里斯·M·哈格曼斯，彼得·J·維爾斯特拉卡斯·施圖滕Janneke DM 莫爾肯波爾-庫南，杜科·范·達倫馬丁·特爾·比斯特約翰·MS ·范德舒特奧爾加·伊琳娜馬丁·戈特哈特卡爾·G·菲格多爾費倫茨·A·舍倫，桑德拉·赫斯坎普馬丁·維爾多斯

節選：

FabPD-L1-IH18 的聚乙二醇化和純化

將 10 Eq. (94.0 nmol) 的 mPEG-DBCO (Click Chemistry Agents, A120) 的 PBS (3.33 mM) 溶液直接添加到 Fab PD-L1-IH18 的 PBS 溶液 (470 μg, 9.40 nmol, 3.0 mg/mL) 中，使 Fab PD-L1-IH18 與 20 kDa PEG 偶聯。將該混合物在 37 °C 下孵育 90 分鐘，使用 Amicon Ultra-4 離心過濾裝置 (MWCO 10 kDa (Merck, UFC801024)) 與 0.02 M 醋酸鹽緩沖液 (pH 4.5，緩沖液 A) 進行緩沖液交換，隨后使用 1 mL HiTrap SP FF (GE Lifesciences, 17505401) 陽離子交換柱在 NGC Quest Plus Bio-Rad 系統上以 0.5 mL/min 的操作速度進行純化。用緩沖液 A 平衡 8 個柱體積后，加入緩沖液 A 中 0.5 M NaCl 的線性梯度（30 個柱體積中 0-0.5 M NaCl）。聚乙二醇化 Fab PD-L1-IH18 通常在約 8 個柱體積（0.15 M NaCl）后洗脫。使用 Amicon Ultra-4 離心 10 kDa MWCO 過濾裝置（Merck，UFC 801024）和無菌 PBS 作為緩沖液濃縮含有純化產物的級分，并通過 12% SDS-PAGE 進行分析。使用 Nanodrop 測定濃度。通過使用 BCA 分析（Pierce BCA 蛋白質測定試劑盒，ThermoFisher Scientific）驗證該方法的可靠性。如上所述，通過進行密度測定法來量化蛋白質純度。純度 Fab PD-L1-IH18-PEG 20kDa ?= 89%。

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