文獻：使用分子定義的成像劑對*性*PD-L1*體定位進行多尺度成像

鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5

作者：艾里斯·M·哈格曼斯，彼得·J·維爾斯特拉卡斯·施圖滕Janneke DM 莫爾肯波爾-庫南，杜科·范·達倫馬丁·特爾·比斯特約翰·MS ·范德舒特奧爾加·伊琳娜馬丁·戈特哈特卡爾·G·菲格多爾費倫茨·A·舍倫，桑德拉·赫斯坎普馬丁·維爾多斯

節選：

位點特異性酶促結合

優化后，使用0.5-1.0 mg*體（片段）和25 eq IH18或IH20對mIgG1 PD-L1進行批量分選，使用50 eq IH18或IH20對Fab PD-L1進行批量分選。用EDTA（終濃度為10 mM）終止反應后，將反應混合物與200 μl Ni-NTA珠在室溫下孵育20分鐘，以除去未反應的*體和分選酶。使用空的旋轉柱（Jena Bioscience，AC-552-25）將珠子從反應混合物中分離，并用洗滌緩沖液（50 mM NaH 2 PO 4 .H 2 O，300 mM NaCl，20 mM 咪唑，0.05％Tween 20，pH 8.0）洗滌兩次，用PBS洗滌兩次。將反應混合物和洗滌級分合并，并使用尺寸排阻色譜法（SEC）純化，以 PBS 中的 1 mM EDTA 作為緩沖液（10 mL/min）。將含有產物的級分合并，并使用 Amicon Ultra-15 離心過濾裝置、MWCO 10 kDa（Merck，Z717185）濃縮。使用無菌 PBS 進行緩沖液交換。在 NanoDrop 上測定*體濃度，使用 UV-vis 程序，在 280 nm 處測量IH20，在 280 和 646 nm 處測量IH18。在還原條件下使用 SDS-PAGE 凝膠電泳（12% 丙烯酰胺）評估蛋白質純度，比較原料、產物和用 5 kDa mPEG-DBCO 點擊的產物，以驗證所有重鏈的功能化。每個構建體生產幾個批次，并在進行體外和體內實驗之前將這些批次合并，以確保批次均勻性。使用密度測定法定量蛋白質純度。在ImageJ中進行密度測定，定義為（產物條帶-背景）/（非產物條帶-背景）×100%。純度mIgG1 PD-L1-IH18 = 85%，Fab PD-L1-IH18 = 96%。

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