FITC（Fluorescein Isothiocyanate）是一種廣泛使用的熒光染料，是熒光素（Fluorescein）衍生的異硫氰酸酯活性化合物，具有良好的熒光性質(zhì)和反應(yīng)活性，常用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、抗體、氨基寡核苷酸等含胺類生物分子。

FITC 是一種綠色熒光染料，在激發(fā)波長約為495 nm（藍(lán)光激發(fā)）時可發(fā)射520–530 nm的綠色熒光，具有高量子產(chǎn)率和良好的成像對比度，是熒光標(biāo)記和成像領(lǐng)域的經(jīng)典工具分子。

常用名熒光素

英文名fluorescein

CAS號518-45-6

分子量332.30600

分子式C20H12O5

熔點(diǎn)N/A

結(jié)構(gòu)特性

FITC是熒光素的異硫氰酸酯衍生物，其中異硫氰酸酯基團(tuán)（–N=C=S）賦予其與伯胺（–NH?）反應(yīng)的能力。這種反應(yīng)通常在堿性條件（pH 8.0~9.0）下進(jìn)行，可與氨基形成穩(wěn)定的硫脲鍵，從而實現(xiàn)分子的共價標(biāo)記。

FITC有兩種異構(gòu)體：5-FITC 和 6-FITC，其中5-FITC是常用的異構(gòu)體，也常作為標(biāo)準(zhǔn)試劑銷售。商業(yè)上提供的“FITC”通常是5-FITC和6-FITC的混合物。

反應(yīng)活性與標(biāo)記機(jī)制

FITC中的異硫氰酸酯基團(tuán)可與伯胺類分子迅速反應(yīng)，在溫和條件下形成穩(wěn)定的硫脲鍵。這使其成為標(biāo)記蛋白質(zhì)、抗體和寡核苷酸的理想選擇。該反應(yīng)步驟簡便高效，常用緩沖液為碳酸氫鹽緩沖液（pH 8.3）或磷酸鹽緩沖液（PBS，調(diào)節(jié)至堿性）。

標(biāo)記完成后，通常需要透析、凝膠過濾或HPLC等手段去除未反應(yīng)的FITC游離染料，以減少背景信號。

主要應(yīng)用領(lǐng)域

免疫熒光染色（Immunofluorescence, IF）
FITC可用于標(biāo)記抗體，用于檢測細(xì)胞或組織中的特定靶標(biāo)。由于其綠色熒光信號清晰明亮，可被多種熒光顯微鏡檢測系統(tǒng)識別。

流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, FACS）
FITC標(biāo)記抗體廣泛用于流式細(xì)胞術(shù)中，用于檢測細(xì)胞表面或胞內(nèi)蛋白，便于實現(xiàn)細(xì)胞亞群分析或細(xì)胞活性評估。

蛋白質(zhì)/多肽標(biāo)記
FITC常用于標(biāo)記酶、激素、受體、細(xì)胞穿膜肽等，用于追蹤其生物分布和作用機(jī)制。

細(xì)胞追蹤和示蹤實驗
通過FITC標(biāo)記的物質(zhì)可用于研究細(xì)胞的吞噬、攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、跨膜過程等。

熒光探針和傳感器構(gòu)建
FITC經(jīng)常用于合成熒光比率探針或用于檢測離子、pH、酶活性的傳感系統(tǒng)。

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