5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯（5(6)-CFDA-SE）是一種熒光探針和生物標記試劑，常用于細胞增殖追蹤、細胞活性分析以及細胞歸巢實驗。它結合了幾種關鍵的功能基團：熒光素（Fluorescein）的熒光特性、二乙酸酯基團的細胞膜通透性，以及琥珀酰亞胺酯（NHS酯）的活潑偶聯性能。憑借這些特性，5(6)-CFDA-SE成為流式細胞術、熒光顯微鏡以及多種生物實驗中不可或缺的工具。

常用名 5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯(CFDA)

英文名 5-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester

CAS號 150347-59-4

分子量 557.461

密度 1.6±0.1 g/cm3

沸點 757.9±70.0 °C at 760 mmHg

分子式 C29H19NO11

熔點 152-154oC(lit.)

閃點 412.2±35.7 °C

工作原理與反應機制

5(6)-CFDA-SE的核心應用機制基于以下幾個步驟：

1. 膜通透性

二乙酸酯基團使分子疏水，能夠輕松穿透細胞膜，進入細胞內部。

2. 酯酶切割

進入細胞后，胞內酯酶迅速水解二乙酸酯基團，釋放出羧基熒光素，產生帶負電荷的極性分子，困留在細胞內，無法自由擴散出去。

3. NHS酯偶聯

羧基熒光素在細胞內與蛋白質中的伯胺基團（例如賴氨酸殘基）發生共價結合，形成穩定的酰胺鍵。這種共價標記確保熒光信號在細胞內長期保留。

這種多步驟機制是CFDA-SE相對于其他熒光染料的重要優勢，使其能夠長期追蹤細胞，而不被洗脫或稀釋。

主要應用

細胞增殖分析

流式細胞術常用5(6)-CFDA-SE對細胞進行熒光標記，通過檢測熒光強度的減半來定量分析細胞的分裂次數。

細胞遷移與歸巢研究

在動物模型中，標記后的細胞可以追蹤其遷移和定位，用于研究免疫細胞、干細胞在體內的分布。

細胞活性檢測

用于檢測細胞存活、細胞膜完整性以及酯酶活性，是活細胞檢測的重要指標。

細胞形態學研究

高亮度熒光信號適合共聚焦顯微鏡下觀察細胞形態和分布。

多色染色

由于其激發/發射光譜不同于其他常用染料（如PE、APC），CFDA-SE可與多種熒光探針組合，實現多色標記。

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