FITC-ConA,異硫氰酸酯-刀豆球蛋白A的結構合成
FITC-ConA 是通過共價結合熒光染料 FITC(Fluorescein Isothiocyanate)與刀豆球蛋白A(Concanavalin A, ConA)制備而成的熒光標記凝集素探針,用于糖類識別、糖蛋白成像、細胞膜糖鏈研究及組織特異性染色。ConA 是一種來源于刀豆的四聚體植物凝集素,分子量約為104 kDa,具有專一性識別 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖殘基的能力。
FITC 與 ConA 的結合基于異硫氰酸酯與蛋白質上的伯胺(主要來自賴氨酸殘基)發生反應生成穩定的硫脲鍵。
合成步驟包括:
緩沖液準備:ConA 通常溶于 pH 8.3 的碳酸氫鈉緩沖液中,以確保賴氨酸氨基處于去質子狀態,有利于親核攻擊 FITC 的異硫氰酸酯基團。
FITC溶液制備:FITC 先溶解于無水 DMSO 中,避光處理,保持濃度在 1–2 mg/mL,確保反應效率。
偶聯反應:將 FITC 緩慢加入 ConA 溶液中,典型摩爾比為 FITC : ConA = 3–5 : 1,反應在避光、室溫條件下進行2小時。
終止與純化:反應完成后用氨基酸或Tris緩沖液封閉未反應的 FITC,隨后采用透析(10 kDa MWCO)或 Sephadex G-25 層析柱去除游離 FITC。
結構驗證:采用 UV-Vis 光譜(280/495 nm)測定標記度(FITC/ConA molar ratio),并可通過 SDS-PAGE 聯合熒光成像確認標記成功。
FITC-ConA 保留了 ConA 的糖識別能力,熒光標記不干擾其與糖殘基結合的四聚體構象,適用于熒光顯微鏡、流式細胞術或糖類生物材料的構建分析,是一類經典的糖生物學探針。
產品名稱:FITC-ConA,異硫氰酸酯-刀豆球蛋白A
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規有機溶劑。
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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