CY5-Avidin，熒光染料CY5標記親和素蛋白的反應步驟

CY5-Avidin的制備核心是通過共價偶聯將熒光染料CY5標記到親和素蛋白（Avidin）分子上，以下為詳細的反應步驟：

材料準備

純化親和素蛋白（濃度一般1-10 mg/mL）

CY5活性酯（如CY5-NHS酯），常溶于DMSO或DMF

緩沖液：通常使用碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.3-8.5），以保證胺基的活性

緩沖液調節

將親和素溶解于碳酸氫鈉緩沖液中，pH維持在8.3-8.5，確保蛋白表面賴氨酸的氨基處于未質子化狀態，有利于與CY5-NHS酯發生反應。

熒光染料加入

將CY5-NHS酯溶液緩慢加入親和素溶液中，避免過量，通常按摩爾比1:3~1:10（蛋白：染料）控制，以獲得適度的標記度。

反應過程

混合液在室溫下反應1-2小時，期間可輕輕搖晃以促進均勻結合。此時CY5的NHS酯基團與親和素蛋白表面賴氨酸的游離氨基形成穩定的酰胺鍵，實現共價連接。

反應終止

反應完成后，通過加入甘氨酸或氨基乙醇終止反應，封閉未反應的NHS酯，避免后續非特異性反應。

純化步驟

采用透析、凝膠過濾柱（如Sephadex G-25）或高速離心過濾器去除未反應的游離CY5和小分子雜質，獲得純凈的CY5-Avidin標記產物。

濃度測定與標記度分析

通過紫外-可見光譜法測定蛋白和CY5的吸光度，計算標記度（染料分子數/蛋白分子數），確保標記效率和功能保持。

保存條件

純化后的CY5-Avidin溶液可添加少量防腐劑（如疊氮鈉），分裝后避光低溫保存（4℃），避免凍融循環，保證標記物的穩定性。

產品名稱：CY5-Avidin，熒光染料CY5標記親和素蛋白

純度：95%+

性狀：基于不同的分子量，呈白色 / 類白色固體，或液體。

溶劑：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規有機溶劑。

儲藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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