牛奶外泌體裝載miRNA204的制備及表征
牛奶外泌體裝載miRNA204的制備：
電轉外泌體裝載 miRNA204： 400 nmol?L -1 miRNA204 與 640 μg 牛奶外泌體混
合于 400 μL 電轉緩沖液中， 樣品與電擊杯冰浴 10 min， 樣品中不能有氣泡。 電擊杯放
入電極間進行放電， 電壓 350 V， 脈沖時間累計 10 ms。 電擊結束后樣品置于 37 o C 恒溫
箱中 20 min， 恢復牛奶外泌體膜結構。 由于 miRNA 是線性分子， 選用 10 kDa 的微量超
濾管純化， 超濾管先用 DEPC 水于 7000 r?min -1 潤洗 10 min。 樣品于 7000 r?min -1 超濾純
化得到裝載 miRNA204 的牛奶外泌體（mExo-miRNA204） 樣品。 所有操作在避光、 低
溫以及無 RNA 酶環境下進行。
牛奶外泌體裝載miRNA204的表征：
牛奶外泌體對 miRNA204 裝載能力的表征： 用多功能酶標儀進行熒光定量，激發波長 490 nm， 發射波長 520 nm， 繪制熒光強度與 miRNA204 濃度的標準曲線（圖1）。 miRNA 包封率計算公式如下：
圖1
純化后樣品 mExo-miRNA204 與等量游離的 miRNA204 進行瓊脂糖凝膠電泳， 78 V
電泳 25 min 后用凝膠成像儀拍攝熒光圖像。
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