PKH26熒光染料的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)以及染色方法

1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

PKH26是一種紅色熒光染料，化學(xué)式為C??H??IN?，分子量為961.34。它能夠穩(wěn)定地結(jié)合到細(xì)胞膜的脂質(zhì)區(qū)域，發(fā)出明亮的紅色熒光，其激發(fā)波長(zhǎng)為551nm，發(fā)射波長(zhǎng)為567nm。PKH26具有高脂溶性，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，對(duì)細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，且不會(huì)影響細(xì)胞的正常生理功能。

2. 應(yīng)用領(lǐng)域

- 細(xì)胞標(biāo)記與示蹤：PKH26廣泛用于體外和體內(nèi)的細(xì)胞標(biāo)記與示蹤研究。它能夠與細(xì)胞膜穩(wěn)定結(jié)合，形成持久的熒光標(biāo)記，使得標(biāo)記的細(xì)胞在生長(zhǎng)周期內(nèi)都能保持熒光信號(hào)。例如，在細(xì)胞遷移和侵襲研究中，PKH26可用于標(biāo)記腫瘤細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)或Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估其遷移和侵襲能力。

- 細(xì)胞增殖研究：PKH26可用于檢測(cè)細(xì)胞增殖。在細(xì)胞分裂過(guò)程中，熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中。通過(guò)流式細(xì)胞儀，可以根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同檢測(cè)出未分裂細(xì)胞、分裂一次、二次、三次及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。

- 外泌體標(biāo)記：PKH26還可用于標(biāo)記外泌體。外泌體是細(xì)胞分泌的微小囊泡，參與細(xì)胞間通訊和疾病發(fā)生發(fā)展。通過(guò)PKH26標(biāo)記外泌體，可以研究其在細(xì)胞間的傳遞和功能。

- 其他應(yīng)用：PKH26還可用于研究細(xì)胞吞噬作用、細(xì)胞間膜的轉(zhuǎn)移、抗原呈遞、細(xì)胞粘附以及組織切片中的神經(jīng)元遷移。

3. 染色方法

- 儲(chǔ)備液制備：將1mg PKH26溶解在1mL DMSO中，得到1mM儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液建議在-20°C或-80°C避光保存，避免反復(fù)凍融。

- 工作液配制：用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS按1:50或1:100稀釋儲(chǔ)備液，得到5-10μM的工作液。

- 細(xì)胞染色：對(duì)于懸浮細(xì)胞，將細(xì)胞密度調(diào)整為1×10?/mL，加入1mL工作液，室溫孵育10-45分鐘，然后用PBS洗滌。對(duì)于貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞培養(yǎng)在蓋玻片上，加入100μL工作液，輕搖覆蓋細(xì)胞，室溫孵育5-30分鐘，再用培養(yǎng)基洗滌。

4. 優(yōu)點(diǎn)

- 高穩(wěn)定性：PKH26的熒光信號(hào)明亮且穩(wěn)定，即使在長(zhǎng)時(shí)間觀察和實(shí)驗(yàn)中也不會(huì)因熒光衰減而影響細(xì)胞追蹤效果。

- 不影響細(xì)胞功能：標(biāo)記后的細(xì)胞仍然保持正常的生物學(xué)活性和功能，不會(huì)干擾細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

- 高靈敏度和特異性：PKH26能夠在很低的濃度下標(biāo)記細(xì)胞，具有高靈敏度和特異性。

- 持久的熒光信號(hào)：PKH26染料能夠與細(xì)胞膜穩(wěn)定結(jié)合，標(biāo)記細(xì)胞在生長(zhǎng)周期內(nèi)都能保持熒光信號(hào)，無(wú)需再次染色。

5. 注意事項(xiàng)

- PKH26試劑為DMSO溶液，在低溫時(shí)會(huì)凝固，需要加熱融解后使用。

- 染色工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，以避免染料水解和變質(zhì)。

- 染色過(guò)程中需要控制適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間和溫度，以確保染料與細(xì)胞膜的結(jié)合效果。

- 洗滌步驟應(yīng)優(yōu)化，以確保既去除多余染料又不破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。

PKH26作為一種高效的細(xì)胞膜標(biāo)記染料，因其高穩(wěn)定性、低毒性以及持久的熒光信號(hào)，在細(xì)胞生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究以及藥物遞送等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

相關(guān)產(chǎn)品：                          

20-C18-GOG-SN38；長(zhǎng)鏈脂肪二酸間接修飾的SN38前藥

CMCS-CYS-RB；羧甲基殼聚糖負(fù)載光敏劑孟加拉紅；高分子前藥

羧甲基殼聚糖負(fù)載光敏劑孟加拉紅-氧化苦參堿的納米粒；OMT/CMCS-CYS-RB NPs

mPEG-hyd-DOX；甲氧基聚乙二醇修飾阿霉素

Ce6@m PEG-hyd-DOX；甲氧基聚乙二醇裝載藥物阿霉素-二氫卟吩e6

cRGD肽偶聯(lián)的喜樹(shù)堿(CPT)前藥；cRGD-CPT NPs

CPT-ss-N3；喜樹(shù)堿-雙硫鍵-疊氮

cRGD肽偶聯(lián)聚磷酸酯-喜樹(shù)堿前藥

三苯基膦-四價(jià)鉑前藥；CisPt(IV)-TPP

莫匹羅星納米前藥

PS-PBI-Lov；磷脂酰絲氨酸-以苝酰亞胺-洛伐他汀

磷脂-聚乙二醇-甘露糖；DSPE-PEG-Man