SYBR Green I 熒光染料的應(yīng)用場(chǎng)景和顏色是什么？

SYBR Green I 是一種常用于分子生物學(xué)中的綠色熒光核酸染料，能夠與雙鏈DNA（dsDNA）特異性結(jié)合并增強(qiáng)其熒光強(qiáng)度，常用于 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）、瓊脂糖凝膠電泳染色、DNA定量檢測(cè)等。

基本信息

名稱：SYBR Green I

發(fā)射顏色：綠色熒光

激發(fā)波長(zhǎng)（Excitation）：約 497 nm

發(fā)射波長(zhǎng)（Emission）：約 520 nm

熒光增強(qiáng)：與dsDNA結(jié)合后熒光增強(qiáng)超過(guò)1000倍

結(jié)構(gòu)：為非共價(jià)結(jié)合小分子染料，具有疏水性吡啶結(jié)構(gòu)，可插入雙螺旋結(jié)構(gòu)中

應(yīng)用場(chǎng)景

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）

SYBR Green I在PCR擴(kuò)增過(guò)程中不斷與新合成的雙鏈DNA結(jié)合，從而同步監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度，反映擴(kuò)增產(chǎn)物的量。

優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、可用于廣泛的引物對(duì)

劣勢(shì)：特異性不如TaqMan探針，因?yàn)?/span>SYBR Green無(wú)法區(qū)分特異擴(kuò)增與非特異擴(kuò)增（如引物二聚體）

瓊脂糖凝膠染色

可作為替代溴化乙錠（EB）的低毒DNA染料，熒光強(qiáng)度高，安全性更好

通常在預(yù)染或泳后染色步驟使用

DNA定量檢測(cè)

通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，可用于快速測(cè)定DNA濃度

注意事項(xiàng)

特異性問(wèn)題：SYBR Green I 只要與雙鏈DNA結(jié)合就能發(fā)光，因此可能會(huì)對(duì)非特異產(chǎn)物（如引物二聚體）產(chǎn)生信號(hào)干擾。

高濃度抑制反應(yīng)：過(guò)量的SYBR Green可能會(huì)抑制PCR反應(yīng)，建議使用廠家推薦濃度（通常為1×工作濃度）。

不適用于RNA直接檢測(cè)，除非先進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

避光保存：對(duì)光敏感，應(yīng)在避光、低溫（通常為-20°C）條件下保存。

? 優(yōu)點(diǎn)

使用方便，兼容性好

成本低于TaqMan探針類染料

與大多數(shù)qPCR平臺(tái)兼容

可廣泛用于常規(guī)PCR和電泳分析

缺點(diǎn)

對(duì)非特異性擴(kuò)增敏感

無(wú)法用于多重PCR檢測(cè)

難以區(qū)分不同片段大小的產(chǎn)物

熒光定量PCR或核酸電泳實(shí)驗(yàn)，SYBR Green I 是一個(gè)常用且高效的工具。需要提高特異性時(shí)，建議結(jié)合熔解曲線分析或考慮使用特異性探針（如TaqMan）。