FITC-D-Lys

FITC-D-Lys 是異硫氰酸熒光素（FITC）與D-型賴氨酸結(jié)合形成的小分子熒光探針。D-賴氨酸不被多數(shù)天然酶識(shí)別，具有較高穩(wěn)定性。FITC 提供綠色熒光特性（Ex/Em：495/519 nm），可用于標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞壁、菌體、聚合物或用于可視化的生物相互作用研究。因其小分子特性，穿透性強(qiáng)且容易修飾，常用于研究細(xì)菌胞壁合成、靶向標(biāo)記以及探針設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)。適用于熒光顯微、流式細(xì)胞術(shù)和免疫檢測(cè)。

名稱與基本信息

名稱：FITC-D-Lys

中文名稱：熒光素標(biāo)記D-賴氨酸

英文名稱：Fluorescein Isothiocyanate-D-Lysine

別名：FITC-D-Lysine、D-Lys(FITC)、D-賴氨酸熒光素偶聯(lián)物

性狀：黃色粉末

結(jié)構(gòu)：

（3）應(yīng)用:

FITC-D-lys常用于細(xì)胞標(biāo)記、蛋白質(zhì)定位和追蹤、細(xì)胞內(nèi)藥物遞送、細(xì)胞間相互作用研究等。通過(guò)將FITC-D-lys與目標(biāo)分子或細(xì)胞結(jié)合，可以追蹤目標(biāo)的活動(dòng)、位置和相互作用，從而研究生物學(xué)過(guò)程和藥物遞送等方面的問(wèn)題。

（4）參考文獻(xiàn)

概述：

With the demonstrated intra-microbial accumulation and acidie pH activatable fluoreseence, E.coli and S. aureus labelled with Rox-actam-d-Lys and FiTC-d-Lys were respectively culturedwith Raw 264.7 macrophages in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum. Raw 264.7cell is a mouse leukaemic macrophage phagocyte cell line. Strong FITC signals were identifiedimmediately after addition of dye-labelled bacteria whereas no ROX fluorescence could beobserved (Figure $), which is consistent with the nonfluorescent nature of ROX-lactam-d-Lys atextracellular neutral pH conditions, Intense ROX fluorescence appeared inside host cells after 1-2h ineubation, The bacteria-restricted FiTC and ROX fuorescence within macrophagesvalidates that covalent incorporation of dyes to peptidogly effectively prevents probe leakage

在添加了10%胎牛血清的DMEM中，用Rox-actam-d-Lys和FiTC-d-Lys標(biāo)記的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別與Raw 264.7巨噬細(xì)胞在微生物內(nèi)積聚和酸性pH激活的熒光下培養(yǎng)。Raw 264.7cell是一種小鼠白血病巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞系。在添加染料標(biāo)記的細(xì)菌后，立即發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的FITC信號(hào)，而沒(méi)有觀察到ROX熒光（圖$），這與ROX-內(nèi)酰胺-d-Lys在細(xì)胞外中性pH條件下的非熒光性質(zhì)是一致的。在1-2小時(shí)的插管后，宿主細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)了強(qiáng)烈的ROX熒光。細(xì)菌限制了巨噬細(xì)胞內(nèi)的FITC和ROX熒光，驗(yàn)證了共價(jià)摻入染料能有效防止探針泄漏

結(jié)論：

Phagolysosomal acidity triggered turn-on fluorescence of ROX-lactam anchored onbacterial peptidoglyean. Raw 264.7 cells were respectively incubated in DMEM containing E.coli (A) or S. aureus (B) pre-labelled with ROX-lactam-d-Lys and FITC-d-Lys, and then treatedwith or without BFA. The cells were harvested, resuspended in sodium phosphate buffer of pH4.0 or 7.2, and then visualized by confocal fluorescence microscopy. Bars, 10 um.

hagolysosome的酸性觸發(fā)了固定在細(xì)菌肽堿上的ROX內(nèi)酰胺的開(kāi)啟熒光。將264.7個(gè)原始細(xì)胞分別在含有預(yù)先標(biāo)記有ROX-內(nèi)酰胺-d-Lys和FITC-d-Lys的大腸桿菌（A）或金黃色葡萄球菌（B）的DMEM中孵育，然后用或不用BFA處理。收集細(xì)胞，重新懸浮在pH4.0或7.2的磷酸鈉緩沖液中，然后通過(guò)共聚焦熒光顯微鏡進(jìn)行可視化。

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