Sulfo CY3-DBCO，CAS:1782950-79-1制備成空心微針遞送合成mRNA的文獻分享

Sulfo CY3-DBCO（磺酸化CY3-DBCO）

Sulfo CY3-DBCO 是一種水溶性熒光染料，用于銅離子自由的點擊化學反應。它結合了Sulfo-CY3（磺酸化Cyanine 3，激發波長550 nm，發射波長570 nm）與DBCO（雙環辛炔）功能團，后者可與疊氮類物質進行快速、特異性的 SPAAC 反應（應變促進的疊氮-炔點擊反應）。由于其磺酸基團增強了水溶性，Sulfo CY3-DBCO 非常適用于在水性體系中標記蛋白、抗體、核酸和多糖類疊氮修飾物。它在細胞標記、活體成像、生物共軛等研究中具有廣泛應用，尤其適合于無需催化劑的生物體系中。

一、基本信息

名稱：Sulfo-CY3-DBCO

中文名稱：磺酸化CY3-DBCO熒光探針

CAS:1782950-79-1

分子量：889

性狀：紅色粉末

結構：

應用：

1、細胞標記和成像：將Sulfo-CY3 DBCO與含有疊氮官能團的生物分子共價偶聯，然后用于細胞成像實驗，可視化特定生物分子的位置和分布。

2、蛋白質-蛋白質相互作用研究：Sulfo-CY3 DBCO可用于標記蛋白質，以研究蛋白質-蛋白質相互作用和信號通路。

3、生物傳感：制備分子探針和生物傳感器，用于檢測生物樣本中特定生物分子的存在和濃度變化。

文獻：

文章來源：

https://www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

文章來源：

https://www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

作者：

Sonia Golombek ? Martin Pilz ? Heidrun Steinle ? Efrat Kochba ? Yotam Levin ? Dominique Lunter ? Christian Schlensak ? Hans Peter Wende ? Meltem Avci-Adali

摘要：

近年來，基于合成mRNA在細胞中生產所需外源蛋白的應用越來越重要。然而，合成mRNA的全身遞送可能導致非特異性攝取到不需要的細胞或器官中，從而無法靶向所需的細胞。因此，合成mRNA的局部和靶向遞送對于到達所需的細胞類型和組織變得越來越重要。在這項研究中，評估了使用基于中空微針注射的方法進行合成mRNA皮內遞送。此外，建立了離體豬皮模型，以分析皮內給藥后皮膚中合成的mRNA介導的蛋白質表達。使用該模型，證明了合成mRNA的高效遞送，這導致檢測到由微量注射的合成mRNA編碼的高水平可分泌的人源化Gaussia螢光素酶（hGLuc）蛋白。有趣的是，在沒有轉染試劑的情況下注射的合成信使核糖核酸也能夠進入細胞并導致蛋白質表達。在開始體內實驗之前，建立的離體豬皮模型可用于評估皮內遞送合成mRNAs后所需蛋白質的成功生產。此外，微針的使用使合成mRNAs能夠友好、無痛、高效地輸送到真皮中；因此，該方法可用于不同皮膚病的局部治療以及疫苗接種和免疫治療。

方法：

合成hGLuc mRNA的Cy3標記

通過無Cu（I）（DBCO）點擊化學對合成mRNA進行Cy3標記。首先，在IVT期間將5-疊氮基-C3-UTP摻入合成mRNA中，隨后通過與DBCO-Sulfo-Cy3孵育將Cy3與5-疊氮基-C3-UTPs結合。因此，在IVT期間，使用1.9 mM 5-疊氮基-C3-UTP（德國耶拿市耶拿生物科學公司）和5.6 mM偽UTP代替7.5 mM假UTP。根據制造商的說明，使用RNeasy MinElute凈化試劑盒（QIAGEN）純化IVT反應混合物。隨后，在37°C下，將5-疊氮-C3-UTP修飾的mRNA與總量為5倍摩爾過量的DBCO-Sulfo-Cy3（Jena Bioscience）一起孵育1小時，用無核酸酶的水調節。使用數據表計算DBCO-Sulfoo-Cy3的摩爾量與疊氮標記的mRNA的量的關系。使用RNeasy MinElute凈化試劑盒（QIAGEN）再次純化反應混合物，通過1%瓊脂糖凝膠電泳和在室溫（RT）下用1×GelRed在三硼酸EDTA（TBE）中染色30分鐘來驗證mRNA的純度。使用光度計測定濃度，并將mRNA儲存在-80°C下。

結論：

Synthesis of hGLuc-Encoding mRNA and Labeling with Cy3

hGLuc編碼mRNA的合成及Cy3標記

此外，為了能夠在皮內遞送后檢測合成的 mRNA，使用無 Cu(I) 的疊氮化物-二芐基環辛炔 (DBCO) 點擊化學將 hGLuc mRNA 標記為 Cy3，其中 Cy3 分子在IVT后與合成 mRNA 中摻入的 5-疊氮基-C 3 -尿苷三磷酸 (UTP) 結合。在圖 1 B 中，使用紫外透射儀可以清晰地看到 Cy3 標記的 mRNA 帶。在約 900 個堿基長度處檢測到*強的熒光信號。然而，還可以看到另外兩個在 1.5 和 2 kb 處的弱帶。出現多個 Cy3 標記帶的原因可能是結合的 Cy3 分子的數量。每個 mRNA 的 Cy3 分子數量越多，分子量就越大。未加Cy3標記的mRNA經GelRed染色后可清晰檢測到，且與強度*高的Cy3標記的hGLuc mRNA處于同一高度。

以上資料由小編zhn提供，僅用于科研

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