FITC-Biotin 熒光素標(biāo)記生物素
FITC-BIOTIN(熒光素標(biāo)記生物素)
FITC-BIOTIN 是由異硫氰酸熒光素(FITC)和生物素通過(guò)共價(jià)鍵連接而成的熒光探針。該分子保留了生物素對(duì)親和素/鏈霉親和素的高親和力,同時(shí)具有 FITC 的典型熒光特性(激發(fā)波長(zhǎng)約495 nm,發(fā)射約519 nm)。FITC-BIOTIN 常用于免疫熒光、細(xì)胞成像、親和標(biāo)記、ELISA 檢測(cè)及微陣列技術(shù)中。其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,水溶性良好,既具靶向識(shí)別能力又具熒光示蹤功能,是分子探針和納米載體修飾的優(yōu)選標(biāo)記分子。
一、簡(jiǎn)介
名稱:FITC-Biotin
中文名稱:熒光素標(biāo)記生物素
英文別名:Fluorescein-Biotin,F(xiàn)luorescein Isothiocyanate-Biotin,Biotin-FITC
化學(xué)式:C??H??N?O?S(典型結(jié)構(gòu))
分子量:約 449.5 g/mol(視結(jié)構(gòu)而略有變化)
結(jié)構(gòu)特征:由熒光素異硫氰酸酯(FITC)與生物素分子通過(guò)共價(jià)方式偶聯(lián)而成,具有雙重功能:熒光標(biāo)記與生物素-親和素識(shí)別能力。
二、分子結(jié)構(gòu)與組成
FITC-Biotin 是一種將熒光素(Fluorescein)與生物素(Biotin)通過(guò)穩(wěn)定的共價(jià)鍵連接的分子探針。典型結(jié)構(gòu)為 FITC 通過(guò)其異硫氰酸基團(tuán)(–N=C=S)與 Biotin 上的氨基反應(yīng),生成穩(wěn)定的硫脲鍵。
FITC(Fluorescein isothiocyanate):一種綠色熒光染料,廣泛用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、抗體、核酸等,具有良好的光穩(wěn)定性。
Biotin:天然維生素B7,能夠與親和素(Avidin)或鏈霉親和素(Streptavidin)結(jié)合,親和力*強(qiáng)(Kd \~10?1? M)。
三、物化性質(zhì)
項(xiàng)目 | 描述 | ||
外觀 | 橙黃色或綠色固體粉末 | ||
分子量 | ~449.5 Da(結(jié)構(gòu)不同略有差異) | ||
溶解性 | 溶于DMSO、DMF、微量乙醇、甲醇,少量可溶于PBS、水 | ||
熒光發(fā)射波長(zhǎng) | 激發(fā)波長(zhǎng):495 nm;發(fā)射波長(zhǎng):519 nm(綠色熒光) | ||
穩(wěn)定性 | 避光,干燥條件下穩(wěn)定;溶液狀態(tài)下易光降解 | ||
儲(chǔ)存條件 | 干燥粉末 -20°C,避光儲(chǔ)存;溶液建議 -20°C 避光并分裝使用,避免反復(fù)凍融 | ||
純度 | 通常 >95%(HPLC) |
四、優(yōu)勢(shì)與特征
1. 雙重功能性:同時(shí)具備熒光檢測(cè)與生物素化親和功能;
2. 高靈敏度:FITC強(qiáng)熒光信號(hào)可實(shí)現(xiàn)微量檢測(cè);
3. 高特異性:Biotin 可與 Streptavidin/NeutrAvidin 形成穩(wěn)定結(jié)合,廣泛用于拉下實(shí)驗(yàn)、免疫熒光、示蹤等;
4. 多用途兼容性:可用于生物素親和系統(tǒng)中與其他 Biotin 標(biāo)記或結(jié)合蛋白共同使用;
5. 小分子量:不會(huì)顯著影響靶標(biāo)的生物活性或空間結(jié)構(gòu)。
五、應(yīng)用領(lǐng)域
1. 免疫熒光染色(IF)
FITC-Biotin 可結(jié)合到鏈霉親和素(Streptavidin)標(biāo)記的抗體或蛋白上,實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)的熒光成像。
2. 細(xì)胞標(biāo)記與追蹤
可用于活細(xì)胞或固定細(xì)胞的表面標(biāo)記,通過(guò)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞功能或位置變化。
3. 熒光拉下實(shí)驗(yàn)(Pull-down)
利用Biotin-Streptavidin系統(tǒng)進(jìn)行靶分子的親和富集,F(xiàn)ITC熒光信號(hào)可用于追蹤或驗(yàn)證結(jié)合情況。
4. 核酸雜交
在原位雜交實(shí)驗(yàn)中,將 FITC-Biotin 探針用于標(biāo)記 DNA 或 RNA 探針,實(shí)現(xiàn)高靈敏度的目標(biāo)片段檢測(cè)。
5. 熒光傳感器開(kāi)發(fā)
作為構(gòu)建熒光傳感平臺(tái)的功能性小分子,用于制備蛋白陣列、微球或微陣列芯片。
六、參考文獻(xiàn)應(yīng)用實(shí)例
1. Zhou et al., *Analytical Chemistry*, 2018
> 利用FITC-Biotin結(jié)合鏈霉親和素-磁珠系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)miRNA的特異富集與熒光定量檢測(cè)。
2. Lee et al., *Biosensors & Bioelectronics*, 2021
> 開(kāi)發(fā)生物素-熒光標(biāo)記納米探針,實(shí)現(xiàn)癌細(xì)胞表面標(biāo)志物的快速檢測(cè)與成像。
3. Yamada et al., *Journal of Neurobiology*, 2002
> 使用FITC-Biotin示蹤神經(jīng)元路徑,結(jié)合鏈霉親和素增強(qiáng)信號(hào),實(shí)現(xiàn)高分辨率神經(jīng)成像。
七、使用方法建議
制備溶液:推薦使用無(wú)水DMSO或DMF配制母液(1–10 mM),分裝避光儲(chǔ)存;
結(jié)合反應(yīng):
可用于標(biāo)記含氨基生物分子,如蛋白質(zhì)、抗體;
或通過(guò)親和素中介與其他生物素化物形成多聚體;
操作注意事項(xiàng):
避免強(qiáng)光直射,實(shí)驗(yàn)操作中使用黃光;
使用后密封冷凍保存,防止光降解;
實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行結(jié)合活性驗(yàn)證(可用鏈霉親和素-FITC標(biāo)準(zhǔn)比較信號(hào)強(qiáng)度)。
八、結(jié)語(yǔ)
FITC-Biotin 作為一種小分子熒光探針,結(jié)合了高親和生物素識(shí)別系統(tǒng)與強(qiáng)熒光發(fā)射能力,廣泛用于生命科學(xué)、藥物研究、分子診斷及納米技術(shù)等多個(gè)領(lǐng)域。其優(yōu)良的多功能性與靈活的結(jié)合方式使其成為構(gòu)建高靈敏度檢測(cè)平臺(tái)與靶向標(biāo)記系統(tǒng)的理想選擇。
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