通過長期在小鼠腹膜內(nèi)注射玉米油或四氯化碳建立肝纖維化動物模型，分別給予TAF 4.5 mg/（kg·天）或TDF 50 mg/（kg·天）處理。其次，體外實驗檢測了TAF/TDF對肝星狀細胞（LX-2細胞）分化、激活、增殖的影響。在TAF/TDF處理后的小鼠肝臟及LX-2細胞中檢測NS5ATP9表達水平以及TGFβ1/Smad3、NF-κB/NLRP3炎性小體信號通路的活性。最后，體內(nèi)、外實驗中，分別基因敲除或基因沉默NS5ATP9后檢測纖維化相關(guān)基因表達水平。

1.TAF/TDF在小鼠體內(nèi)****四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化

動物實驗顯示，TAF/TDF****四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化及肝臟炎性反應(yīng)，同時體外研究發(fā)現(xiàn)TAF/TDF可以調(diào)節(jié)肝星狀細胞分化、激活、增殖：TAF/TDF**下調(diào)細胞外基質(zhì)沉積相關(guān)基因的表達水平，并改善Ishak評分系統(tǒng)評估的肝纖維化嚴重程度（圖1）。

圖1. 基于Ishak評分系統(tǒng)評估的纖維化評分和分級（n=7）

注：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

2.TAF/TDF在體內(nèi)外均**TGFβ1/ Smad3、NF-κB/ NLRP3炎性小體信號通路的活性

TGFβ1/Smad3信號通路是目前已知的關(guān)鍵的肝纖維化驅(qū)動因素[3]；NLRP3炎性小體能夠激活NF-κB信號通路，導(dǎo)致肝星狀細胞激活、膠原沉積、凋亡蛋白酶1和白細胞介素1β釋放[4-6]。

四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化中，TGFβ1/Smad3和NF-κB信號通路被激活，而TAF/TDF**使其活性**降低；TAF/TDF降低四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化中升高的NLRP3、凋亡蛋白酶1和白細胞介素1β水平（圖2），且TAF/TDF****LPS激活的NLRP3炎性小體和肝星狀細胞；TAF/TDF促使TGFβ1激活的肝星狀細胞轉(zhuǎn)化為靜息狀態(tài)（合成蛋白及mRNA水平降低），并促進肝星狀細胞凋亡、**其增生。

綜上，TAF和TDF通過TGFβ1/Smad3和NF-κB/NLRP3炎癥小體兩條平行信號通路影響肝纖維化的進程；同時，因為NF-κB信號通路在TGFβ1/Smad3激活后會自發(fā)激活，所以推測兩條信號通路之間也存在相互調(diào)節(jié)。

圖2. Western Blot及PT-qPCR分析顯示的小鼠肝臟內(nèi)NLRP3表達水平   注：*P<0.05

3.TAF/TDF通過NS5ATP9在體內(nèi)外減輕肝纖維化

丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9（NS5ATP9）被發(fā)現(xiàn)能夠**肝星狀細胞的增生并促進其凋亡[7]。NS5ATP9缺陷**增加細胞外基質(zhì)沉積并加重肝臟損害；TAF/TDF在體內(nèi)外均上調(diào)NS5ATP9的表達（圖3）。NS5ATP9過表達****TGFβ1/ Smad3和NF-κB信號通路，而沉默NS5ATP9使這些信號通路的活性**增強；因此NS5ATP9通過TGFβ1/ Smad3和NF-κB/ NLRP3炎性小體信號通路**肝纖維化。體內(nèi)外基因敲除或基因沉默NS5ATP9均降低TAF/TDF**效果。

TAF/TDF通過上調(diào)NS5ATP9表達，調(diào)控TGFβ1/Smad3和NF-κB/NLRP3炎性小體信號通路，從而阻止肝纖維化的進展并促進其逆轉(zhuǎn)。TAF/TDF可調(diào)控肝星狀細胞分化、激活、增殖。該研究結(jié)果提供了TAF/TDF可能具有抗肝纖維化作用的證據(jù)。

西安齊岳生物供應(yīng)抗體種屬∶兔抗單克隆抗體，鼠抗單殼隆抗體。兔抗多殼隆抗體。抗體的濃度為1mglml。抗體及相關(guān)標記抗體:HRP標記抗體，Biotin標記抗體，Gold標記抗體，RBITC標記抗體，AP標記抗體,FITC標記抗體，Cy3標記抗體，Cy5標記抗體，Cy5.5標記抗體，Cy7標記抗體，PE標記抗體，PE-Cy3標記抗體，PE-Cy5標記抗體，PE-Cy5.5標記抗體，PE-Cy7標記抗體，APC標記抗體，AlexaFluor 350標記抗體，Alexa Fluor 488標記抗體，Alexa Fluor 555標記抗體，AlexaFluor647標記抗體抗體的交叉反應(yīng)︰人，小鼠，大鼠，雞，狗，豬，羊，牛，兔.....抗體的應(yīng)用:可以用于做石蠟切片免疫組化，冰凍切片兔疫組化，Elisa , wB，免疫熒光等實驗。

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zzj 2021.3.24