名稱：1M 醋酸鋰溶液/乙酸鋰溶液

英文名:1M Lithium Acetate solution

描述：齊岳出品的**酵母轉(zhuǎn)化試劑盒主要用于釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，該試劑盒遵循廣大用戶的使用習(xí)慣，分別提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液，PEG、LiAc均經(jīng)過濾除菌，Carrier DNA經(jīng)特殊優(yōu)化處理，更有助于提高質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率。該試劑盒可根據(jù)實(shí)際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉(zhuǎn)化預(yù)混液，既方便使用，又經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

感受態(tài)細(xì)胞制備：

1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

2.挑取酵母單菌落在YPDA培養(yǎng)基平板上劃3-5 mm的短線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時(shí)，把酵母細(xì)胞接種到3 mL YPDA液體培養(yǎng)基中，30 ℃過夜培養(yǎng)。

4.**天轉(zhuǎn)接到含有30-50 mL YPDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD600達(dá)到0.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。

5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水）重懸后轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。

注意：10 × LiAc Solution經(jīng)過pH緩沖，無需添加TE作為緩沖劑。

7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉(zhuǎn)化按照每管100 μL分裝，用于文庫轉(zhuǎn)化不分裝。

8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態(tài)細(xì)胞即制備完畢。

注意：制備好的感受態(tài)**立即使用，在第8步離心前，室溫放置不應(yīng)超過5小時(shí)。

轉(zhuǎn)化預(yù)混液配制：

酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化：

1.將360 μL預(yù)混液加入1支感受態(tài)細(xì)胞中，反復(fù)吹吸沉淀，使酵母細(xì)胞徹底懸浮于預(yù)混液中。

2.30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。

3.（加入20 μL DMSO，可選）42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4.12000 rpm離心15 s，棄上清液。

5.（可選步驟）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60 min。12000 rpm離心15 s，棄上清液。

6.加入0.1-1 mL無菌去離子水或0.9%氯化鈉溶液重懸沉淀，涂篩選培養(yǎng)基平板，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

酵母文庫轉(zhuǎn)化：（需用15-50 mL離心管）

1. 將2520 μL預(yù)混液加入到感受態(tài)細(xì)胞（未分裝）沉淀中，震蕩使感受態(tài)細(xì)胞充分重懸。

2. 放置在30 ℃的水浴鍋中孵育50 min，每10 min混勻一次。

3.（加入160 μL DMSO，可選）放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4. 3000 rpm離心5 min，棄上清液。

5.（可選步驟）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重懸沉淀，30 ℃搖床震蕩培養(yǎng)90 min，3000 rpm離心5min，棄上清液。

6.加入15 mL無菌去離子水或0.9% 氯化鈉溶液重懸菌體，涂篩選培養(yǎng)基平板（50個(gè)平板左右），30 ℃培養(yǎng)2-4天。

注意事項(xiàng)：

1.轉(zhuǎn)化全程需無菌操作。

2.初次使用Carrier DNA，請(qǐng)把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。下次使用前在冰上解?/span>Carrier DNA。反復(fù)凍融3-5次后需重新變性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫環(huán)境下完全溶解后使用。

4. 根據(jù)質(zhì)粒濃度增減體積，增加酵母質(zhì)粒的純度和濃度可以提高轉(zhuǎn)化效率。

供應(yīng)產(chǎn)品目錄：

EMMG培養(yǎng)基（含谷氨酸鈉） 2×500ml

EMMS培養(yǎng)基（含山梨醇） 2×500ml

EMM培養(yǎng)基（鈣鎂糖提供無菌母液） 10×0.5L

EMM培養(yǎng)基（過濾除菌） 2×500ml

EMM培養(yǎng)基（需過濾除菌） 10×0.5L

SDC液體培養(yǎng)基(酵母衰老實(shí)驗(yàn)) 2×500mL

YE Agar Medium 10×0.5L

YE Medium 10×0.5L

YEP Agar Medium 10×0.5L

YEP Medium 10×0.5L

YEPM Agar Medium/YPM Agar Medium 10×0.5L

YEPM Medium/YPM Medium 10×0.5L

YES Agar Medium 10×0.5L

YES Medium 10×0.5L

YPDS Liquid Medium 100mL

YPS Agar Medium/YEPS Agar Medium 10×0.1L

YPS Medium/YEPS Medium 10×0.1L

低糖EMM培養(yǎng)基 2×500ml

酵母MM培養(yǎng)基/無機(jī)鹽培養(yǎng)基（2×） 2×500ml

缺磷EMM培養(yǎng)基 2×500ml

無糖EMM培養(yǎng)基 2×500ml

pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體 20μl

pGBKT7-Lam Vector  酵母雙雜交對(duì)照載體 20μl

pGADT7-AD Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

pGADT7-T Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體 20μl

pBridge Vector 酵母三雜交克隆載體 20μl

pGBT9 Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 300μl

Y2HGold Chemically Competent Cell  酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 100μl

Y187 Yeast Strain  酵母雙雜交用甘油菌 300μl

Y187 Chemically Competent Cell  酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 100μl

yyp2021.2.22