由于現(xiàn)有的熒光底物種類較少,迫切需要出現(xiàn)更多種類且廉價的酶底物來解決這些問題。Bissell等報道了7-氨基-4-三氟甲基香豆素的合成及其與氨基酸的酯化,指出該類化合物具有較好的應(yīng)用前景。AFC[7-氨基-4-三氟甲基香豆素]是許多AFC酶底物的前體物質(zhì),同時也被用作以AFC為基礎(chǔ)的酶底物的校準標準液。大量的研究結(jié)果表明,較之于AMC[7-氨基4-甲基香豆素]酶底物,AFC的熒光底物所產(chǎn)生的AFC比AMC具有更長的吸收和熒光波長。脯氨酸氨肽酶和丙氨酸氨肽酶是微生物體內(nèi)常見的兩種酶，但是利用這兩種酶去水解AFC為基礎(chǔ)的酶底物用于微生物檢測還沒有相關(guān)文獻的報道。本文在合成兩種新型氨肽酶底物用于微生物的檢測。合成方法是以間氨基酚,三氟乙酸乙酯為原料一步反應(yīng)得到7-氨基4-三氟甲基香豆素( AFC),再以AFC為原料分別與Boc-Pro-OH , Boc-Ala-OH反應(yīng),再經(jīng)脫保護基得到氨肽酶底物。其合成路線如下所示。

實驗步驟

步驟一：7-氨基-4-三氟甲基香豆素(AFC)的合成

步驟二：1.3 Ala-7-氨基-4-三氟甲基酶底物的合成

（1）Boc-Ala-7-氨基4-三氟甲基的合成

（2）Ala-7-氨基-4-三氟甲基酶底物的合成

步驟三：Pro-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物的合成

步驟四：Boc-Pro-7-氨基-4-三氟甲基的合成

（1）二氯三苯基膦的合成

（2）肽的合成

（3）Pro-7-氨基4-三氟甲基氨肽酶底物的合成

結(jié)果

Boc-Ala-7-氨基-4-三氟甲基選用**的Steg-lich酯化反應(yīng),反應(yīng)步驟比較簡單,但反應(yīng)時間較長而且生成的副產(chǎn)物DCU較難處理干凈。因此在合成Boc-Pro-7-氨基4-三氟甲基時,利用二氯三苯基膦為催化劑,但由于三苯基膦與六氯乙烷合成磷肽的反應(yīng)有明顯的溶劑效應(yīng),在二氯甲烷中反應(yīng)很快,因此利用三苯基膦與六氯乙烷在二氯甲烷溶液中生成二氯三苯基膦,再與保護的氨基酸反應(yīng)生產(chǎn)混酐,不但能使羧酸活化,而且有很好的區(qū)域選擇性,在胺的親核進攻下能惟一的生成酰胺,該反應(yīng)的產(chǎn)率較高,而且大大縮短了反應(yīng)時間。但由于二氯三苯基膦的活潑性高,易水解,因此只有在使用時才制備,而且反應(yīng)過程中要注意密閉性。在脫Boc-保護基反應(yīng)完成后,要先旋蒸除去大部分三氟乙酸,再用飽和NaHCO，來中和至中性。此反應(yīng)的副產(chǎn)物都為氣體,后處理簡單。

從Ala-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物CNMR譜圖上,可以看到由于三氟甲基的存在，氟對鄰近的碳有影響,對相鄰的碳影響大,碳峰縮小而且距離較遠,在8 120.11 ~122.81(C-10)出現(xiàn)明顯的裂分,分開為兩個單峰;對C-3影響稍小,出現(xiàn)同高度的縮小的四重峰,在8140.97位置。從"3CNMR 、'HNMR譜圖可以確認 Ala-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物的結(jié)構(gòu)。

西安齊岳生物科技可以提供各種酶化學產(chǎn)品包括有β-半乳糖氧化酶，彈性蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，膠原酶，梭菌蛋白酶，膽固醇酯酶等

產(chǎn)品供應(yīng)

Rhodamine 110 (high purity)

R110-PEG (Rhodamine 110-PEG)

NucView 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in PBS

NucView 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO

NucView 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells

NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO

D2R

BZiPAR

BZAR

Ac-IETD-R110

Ac-DEVD-AMC

2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

Dihydrorhodamine 123, dihydrochloride salt

二氫若丹明123

二氫乙錠

CF640R Tyramide

CF594 Tyramide

CF568 Tyramide

CF543 Tyramide

CF488A Tyramide

CF350 Tyramide

Biotin-XX Tyramide

zl 02.03