PEG修飾蛋白質主要通過PEG末端羥基與蛋白質氨基酸殘基反應實現,而PEG末端羥基活性很差,必須使用活化劑對其進行活化,才能在體內溫和的條件下對蛋白質進行共價修飾。常用的PEG活化方法有:
(1)羰基二咪唑法:該方法**用于多肽的合成,被證明是形成酰胺鍵的良好試劑。
(2)N-羥基琥珀酰亞胺法: (a)N,N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化,此反應也需要在無水條件下進行。(b)琥珀酸酐及 N-羥基琥珀酰亞胺活化,該方法活化得到的聚乙二醇活性較高,**是在非水環境中進行蛋白的偶聯。
(3)氰脲酰氯法:氰脲酰氯又名三氯化嗪(TST) 是對稱雜環化合物,David 等利用 TST 與聚乙二醇上的羥基反應 只有一個氯原子被取代,其它的氯原子與蛋白質的氨基反應。
(4)光氣參與的活化方法:Kurfuerst 等在其專利中提到一些方法,分別用 N-羥基琥珀酰亞胺鉀鹽、硝基苯酚及三氯苯酚與光氣反應制備活化聚乙二醇。活化主要分兩步如下圖所示。
(5)聚乙二醇對蛋白質的半胱氨酸殘基的化學修飾,常見特異性修飾疏基的PEG活化方法如下圖。
(6)酶法定點連接聚乙二醇:除了傳統的化學修飾方法,也可以通過其它途徑如酶催化來達到修飾的目的,以谷氨酰胺酶(G-TGase)為例。
最后,選擇合適的蛋白質氨基酸殘基位點或小分子**位點進行定點修飾。用活化后的PEG對合適的蛋白質氨基酸殘基進行定點修飾,從而改善天然蛋白質的療效。
MPEG–PCL-SS-TAT 聚乙二醇-聚已內酯-二硫鍵-多肽
mPEG-TK MPEG-thioketal 甲氧基聚乙二醇-酮縮硫醇
mPEG-TK-PCL/PLA/PLGA 甲氧基聚乙二醇-酮縮硫醇-聚已內酯/聚乳酸
ND-PEG-COOH/FA 納米鉆石-聚乙二醇-羧基/葉酸
PBA-PEG-Azo PBA-PEG-SH 苯硼酸-聚乙二醇-偶氮苯/巰基
PCL-PEG-GA /HMME 聚已內酯-聚乙二醇-甘草次酸/血卟啉單甲醚
PDA-PEG-FA/MAL/NH2/NHS 聚多巴胺-聚乙二醇-葉酸/馬來酰亞胺/氨基/活性脂
MSN-SS-PEI-PEG-PBA 介孔硅聚乙烯亞胺-苯硼酸
PALA-PEG-PALA 聚丙氨酸-聚乙二醇-聚丙氨酸定制
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