化學結構與性質
sulfo-Cyanine5 dUTP是由脫氧尿苷三磷酸(dUTP)和帶有sulfo-Cyanine5熒光染料的共價連接體組成。其核心結構包含:
dUTP部分:為DNA合成所必需的核苷酸之一,可被DNA聚合酶識別并摻入DNA鏈中,取代普通的dTTP。
sulfo-Cyanine5染料:一種水溶性、帶負電荷的熒光染料,發射波長約為670 nm,屬于紅色熒光范圍。sulfo基團的存在顯著提升了染料的水溶性,減少了非特異性結合和染料聚集,適合在生物體系中使用。
連接基團:通常染料通過化學鍵(如通過核苷酸的堿基或糖部分)與dUTP連接,使染料能穩定地摻入DNA中。
功能和用途
sulfo-Cyanine5 dUTP的主要功能是作為熒光標記核苷酸,在DNA合成過程中被摻入新合成的DNA鏈,從而實現DNA分子的直接熒光標記。這一特性使其在分子生物學研究中發揮重要作用,具體應用包括:
DNA標記與擴增檢測
在PCR或其他核酸擴增技術中摻入sulfo-Cyanine5 dUTP,可在擴增的DNA分子中直接引入熒光標記,方便實時檢測和后續分析。無需額外的標記步驟,簡化操作流程。
熒光原位雜交(FISH)和細胞成像
利用sulfo-Cyanine5 dUTP標記的探針,可以精準定位細胞或組織中的特定DNA序列。由于該染料發射紅色熒光,能與其他顏色的染料多重標記配合使用,實現多重靶標檢測。
基因組學與分子診斷
適用于微陣列、染色體分析、突變檢測等技術中,為基因研究和臨床診斷提供高靈敏度的標記手段。
單分子熒光檢測和活細胞成像
由于其較高的光穩定性和較強的熒光強度,sulfo-Cyanine5 dUTP適合在單分子水平進行檢測及在活細胞環境中進行成像。
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